[发明专利]抗甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

说明书

本发明提供用于抗甲氧西林金黄色葡萄球菌检测改良的检测方法。所述检测方法具体用于去除假阳性结果，所述假阳性结果源于病人样品中存在混合的细菌种群。

技术领域

本发明涉及抗甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子检测。本发明更具体涉及减少假阳性结果的改良的MRSA检测方法。

背景技术

抗甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是一种主要的医院和社区获得性病原体，它能引起严重的感染，如手术伤口感染，肺炎，心内膜炎及败血症。针对甲氧西林的抗性是由于mecA基因的存在，所述基因能编码修饰的青霉素结合蛋白，PBP2a或PBP2′，对B-内酰胺药物具有降低的亲和性。mecA基因由名为SCCmec的盒(葡萄球菌盒染色体mec)携带(Ito etal.，2001，Antimicrob.Agents Chemother.45(5)：1323-1336；Hiramatsu，et al.，2001，Trends Microbiol.Oct；9(10)：486-93)，这个能移动的元件，能够整合到金黄色葡萄球菌和其它凝固酶阴性葡萄球菌(主要是表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌)的染色体中。SCCmec的特征是有末端反向和同向的重复序列，一组位点特异性的重组酶基因(ccrA和ccrB)，和mecA基因复合体(Ito et al.，1999，Antimicrob.Agents Chemother.43：1449-1458；Katayama et al.，2000，Antimicrob.Agents Chemother.44：1549-1555)。所述mecA基因盒SCCmec插入到金黄色葡萄球菌基因组的插入位点是已知的，并且是保守的序列(Ito etal.，2001，Antimicrob.Agents Chemother.45：1323-1336)。插入到金黄色葡萄球菌染色体后，SCCmec有左末端连接区和右末端连接区(见图1)，在此SCCmec序列和金黄色葡萄球菌染色体序列相连。之前已分析了包围SCCmec DNA左右边界的区域(即，各自为attL和attR)的核苷酸序列和包围SCCmec DNA整合位点的区域(即attBscc，SCCmec DNA的细菌染色体结合位点)的序列。所述整合位点的序列分析表明attBscc位于新的开放阅读框(ORF)，orfX的3′端。orfX编码推定的159-氨基酸多肽，所述多肽和一些先前鉴定的未知功能的多肽有序列同源性(Ito et al.，1999，Antimicrob.Agents Chemother.43：1449-1458)。此外也已研究了SCCmec的mecA区域的组织结构(Oliveira，D.C.，et al.，2000，Antimicrob.AgentsChemother.44(7)：1906-1910)。

MRSA能被健康的人群携带而不引起任何疾病，但当这些健康的携带者进入医院，能够感染住院的病人。此外，病人可以感染自己，例如，如果一个人经受外科手术，感染的风险就会增加。MRSA健康携带者构成了MRSA的储存体，必须对这些携带者进行筛选以通过局部净化根除所述株。现在MRSA筛选被认为是在世界范围内减少MRSA株流行的主要方法。通常，在病人的MRSA检测中，从病人身上得到鼻拭子并反复培养，以鉴定MRSA株是否存在。可以通过从鼻拭子上直接鉴定检测而取消培养的需要。培养物鉴定方法通常需要最少24小时，更通常的是72小时，以获得结果。新的显色培养基(培养基中含有基质，一般是抗生素(如头孢西丁)来选择抗甲氧西林的株)能够潜在地减少所述时间而导致24～48小时的时间周期。然而，在MRSA感染的病例中，需要在几小时内得到结果，因为病人应该被隔离直到得知结果。因此，极需一种能在2～4小时内得到结果的可靠的MRSA的分子检测方法。