[发明专利]正丁醇的生产方法

权利要求书

1.一种重组微生物，包含：

(1)编码多肽的至少一种异源丁醇生物合成途径基因，所述多肽催化选自以下构成的组的底物到产物的转化：

(a)乙酰-CoA到乙酰乙酰-CoA

(b)乙酰乙酰-CoA到(S)-3-羟基丁酰-CoA

(c)(S)-3-羟基丁酰-CoA到巴豆酰-CoA

(d)巴豆酰-CoA到丁酰-CoA

(e)丁酰-CoA到丁醛

(f)丁醛到丁醇；和

(2)编码纤维素酶的至少一种异源基因；

其中所述重组微生物将纤维素转化成丁醇。

2.权利要求1的微生物，其中所述微生物是选自由以下构成的组的属的成员：梭菌属、发酵单胞菌属、埃希杆菌属、沙门氏菌属、红球菌属、假单胞菌属、芽胞杆菌属、乳杆菌属、肠球菌属、产碱杆菌属、克氏杆菌属、类芽孢杆菌属、节杆菌属、棒状杆菌属、短杆菌属、毕赤氏酵母属、假丝酵母属、汉逊酵母属和酵母属。

3.权利要求1的微生物，其中所述微生物是选自由大肠杆菌、真养产碱杆菌、地衣芽孢杆菌、浸麻类芽孢杆菌、红串红球菌、恶臭假单胞菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、鹑鸡肠球菌、粪肠球菌、枯草芽胞杆菌、卡尔斯伯酵母和酿酒酵母构成的组的物种的成员。

4.权利要求2的微生物，其中所述微生物是酵母属物种。

5.权利要求4的微生物，其中所述微生物是酿酒酵母。

6.权利要求1的微生物，其中所述纤维素酶选自由葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡糖苷酶构成的组。

7.权利要求6的微生物，其中所述纤维素酶选自由葡聚糖内切酶II、纤维二糖水解酶II和β-葡糖苷酶I构成的组。

8.权利要求7的微生物，其中所述微生物包含编码葡聚糖内切酶II、纤维二糖水解酶II和β-葡糖苷酶I的异源基因。

9.权利要求8的微生物，其中所述葡聚糖内切酶II和纤维二糖水解酶II基因来自里氏木霉，所述β-葡糖苷酶I基因来自棘孢曲霉。

10.权利要求1的微生物，其中所述丁醇生物合成途径基因选自由乙酰-CoA C-转乙酰酶(硫解酶)、3-羟基丁酰-CoA脱氢酶、3-羟基丁酰-CoA脱水酶(巴豆酸酶)、丁酰-CoA脱氢酶、丁醛脱氢酶和丁醇脱氢酶构成的组。

11.权利要求10的微生物，其中所述丁醇生物合成途径基因来自产溶剂细菌。

12.权利要求11的微生物，其中所述产溶剂细菌是丙酮丁醇梭菌。

13.权利要求10的微生物，其中所述微生物包含编码乙酰-CoA C-转乙酰酶(硫解酶)、3-羟基丁酰-CoA脱氢酶、3-羟基丁酰-CoA脱水酶(巴豆酸酶)、丁酰-CoA脱氢酶、丁醛脱氢酶和丁醇脱氢酶的异源丁醇生物合成途径基因。

14.权利要求13的微生物，其中所述丁醇生物合成途径基因来自产溶剂细菌。

15.权利要求14的微生物，其中所述产溶剂细菌是丙酮丁醇梭菌。

16.权利要求1的微生物，其中竞争产物途径已被破坏。

17.权利要求16的微生物，其中所述竞争产物途径是乙醇途径。

18.权利要求17的微生物，其中所述乙醇途径通过灭活一种或更多种醇脱氢酶来破坏。

19.一种用于从纤维素生产丁醇的方法，包括：

(a)提供根据权利要求1-18的任一项的重组微生物；和

(b)在一定条件下使所述微生物与纤维素接触从而生产丁醇。

20.权利要求19的方法，进一步包括分离生产的丁醇的步骤。