[发明专利]用于从单个样品中分离基因组DNA、RNA和蛋白质的方法

权利要求书

1.一种用于分离和/或纯化至少两种细胞组分的方法，所述细胞组分选自基因组DNA、总RNA和蛋白质，所述方法包括：

a)通过用裂解液裂解生物样品，产生含所述细胞组分的水溶液；

b)将所述水溶液在使得基因组DNA结合第一矿物支持体的条件下上样至所述第一矿物支持体；

c)收集含有未结合的RNA和蛋白质的流过液；

d)将步骤(c)中的所述流过液与偶极非质子溶剂混合以形成混合液，然后将所述混合液在使得RNA结合第二矿物支持体的条件下上样至所述第二矿物支持体；和

(e)收集含蛋白质的流过液。

2.权利要求1的方法，所述方法还包括洗涤所述第一矿物支持体和从所述第一矿物支持体中洗脱基因组DNA。

3.权利要求1的方法，所述方法还包括洗涤所述第二矿物支持体和从所述第二矿物支持体中洗脱RNA。

4.权利要求1的方法，所述方法还包括从步骤(e)的流过液中纯化蛋白质。

5.权利要求4的方法，其中所述蛋白质通过沉淀、凝胶过滤或疏水作用色谱(HIC)纯化。

6.权利要求1的方法，其中所述裂解液包含离液盐、非离子型去污剂和还原剂。

7.权利要求6的方法，其中所述离液盐为盐酸胍。

8.权利要求6的方法，其中所述非离子型去污剂选自：三甘醇单月桂基醚、(辛基苯氧基)聚乙氧基乙醇、失水山梨醇单月桂酸酯、叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60和聚山梨酯80或其组合。

9.权利要求8的方法，其中所述非离子型去污剂或其组合的范围为0.1-10％。

10.权利要求1的方法，其中所述裂解液包含1-10M盐酸胍、0.1-10％TWEEN^TM 20和0.1-10％NP-40。

11.权利要求1的方法，其中所述第一矿物支持体和第二矿物支持体是多孔或无孔的，并且由金属氧化物或混合金属氧化物、硅胶、二氧化硅膜、玻璃颗粒、玻璃粉、石英、氧化铝、沸石、二氧化钛或二氧化锆组成。

12.权利要求1的方法，其中所述第一矿物支持体和第二矿物支持体各自为二氧化硅膜。

13.权利要求1的方法，其中所述偶极非质子溶剂选自：丙酮、乙腈、四氢呋喃(THF)、甲乙酮、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜。

14.权利要求1的方法，其中所述生物样品选自：培养细胞、微生物、植物、动物或酶反应的混合物。

15.一种用于分离微小RNA的方法，所述方法包括使从权利要求3中洗脱的总RNA接受一个或多个另外的分离步骤以纯化微小RNA。

16.一种用于从单个生物样品中分离和/或纯化基因组DNA、总RNA和蛋白质的试剂盒，所述试剂盒包含：

a)用于裂解生物样品的裂解液；

b)用于结合基因组DNA的第一矿物支持体；

c)用于结合RNA的第二矿物支持体；

d)用于从所述第一矿物支持体中洗脱基因组DNA的洗脱液；

e)用于从所述第二矿物支持体中洗脱RNA的洗脱液；

任选地，所述试剂盒还包含：

用于在基因组DNA和RNA结合各自的矿物支持体后从流过液中分离蛋白质的工具。

17.权利要求16的试剂盒，其中所述裂解液包含离液盐、非离子型去污剂和还原剂。

18.权利要求16的试剂盒，其中所述第一矿物支持体和所述第二矿物支持体各自为二氧化硅膜。

19.权利要求16的试剂盒，其中所述试剂盒还包含偶极非质子溶剂，所述偶极非质子溶剂选自：丙酮、四氢呋喃(THF)、甲乙酮、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜。