[发明专利]使用包含非天然氨基酸的蛋白质进行定向进化

权利要求书

1.一种根据一种或多种目的功能筛选多肽变体文库的方法，该方法包括：

使文库内的一群多肽变体的表达标准化，其中该群中至少有一个多肽变体包含至少一个非天然氨基酸，这样表达的变体的平均比例为10∶1或更低，以及；

从该群中筛选展示目的功能的变体，从而观察到目的功能的差异与变体活性的差异呈相关性。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述群中的每一个多肽变体都包含至少一个非天然氨基酸。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，表达的变体的比例为5∶1或更低。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，表达的变体的比例为1∶1。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当变体的表达被标准化后筛选的敏感性得到提高。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，展示目的功能的变体的筛选包括在表达的变体的比例为1∶10或更低时筛选可检测水平的目的功能的差异。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，展示目的功能的变体的筛选包括在表达的变体的比例为1∶5或更低时筛选可检测水平的目的功能的差异。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，筛选多肽变体文库包括筛选如下变体的文库：抗体片段变体、α-1抗胰蛋白酶变体、血管抑素变体、抗溶血因子变体、脱辅基载脂蛋白变体、载脂蛋白变体、心钠素变体、心房利钠多肽变体、心房肽变体、C-X-C趋化因子变体、T39765变体、NAP-2变体、ENA-78个变体、Gro-a变体、Gro-b变体、Gro-c变体、IP-10变体、GCP-2变体、NAP-4变体、SDF-1变体、PF4变体、MIG变体、降钙素变体、c-kit配体变体、细胞因子变体、CC趋化因子变体、单核细胞化学引诱物蛋白-1变体、单核细胞化学引诱物蛋白-2变体、单核细胞化学引诱物蛋白-3变体、单核细胞炎性蛋白-1α变体、单核细胞炎性蛋白-1β变体、RANTES变体、I309变体、R83915变体、R91733变体、HCC1变体、T58847变体、D31065变体、T64262变体、CD40变体、CD40配体变体、C-kit配体变体、胶原变体、集落刺激因子(CSF)变体、补体因子5a变体、补体抑制因子变体、补体受体1变体、细胞因子变体、上皮细胞中性粒细胞激活肽-78变体、GROα变体、MGSA变体、GROβ变体、GROγ变体、MIP1-α变体、MIP1-β变体、MCP-1变体、表皮生长因子(EGF)变体、上皮细胞中性粒细胞激活肽变体、促红细胞生成素(EPO)变体、去角质毒素变体、因子IX变体、因子VII变体、因子VIII变体、因子X变体、成纤维细胞生长因子(FGF)变体、纤维蛋白原变体、纤连蛋白变体、G-CSF变体、GM-CSF变体、葡萄糖脑苷脂酶变体、促性腺激素变体、生长因子变体、生长因子受体变异、Hedgehog蛋白变体、血红蛋白变体、肝细胞生长因子(HGF)变体、水蛭素变体、人血清白蛋白变体、ICAM-1变体、ICAM-1受体变体、LFA-1变体、LFA-1受体变异、胰岛素变体、胰岛素样生长因子(IGF)变体、IGF-I变体、IGF-II变体、干扰素变体、干扰素-α变体、干扰素-β变体、干扰素-γ变体、白细胞介素变体、IL-1变体、IL-2变体、IL-3变体、IL-4变体、IL-5变体、IL-6变体、IL-7变体、IL-8变体、IL-9变体、IL-10变体、IL-11变体、IL-12变体、角质化细胞生长因子(KGF)变体、乳铁蛋白变体、白血病抑制因子变体、荧光素酶变体、神经营养因子变体、中性粒细胞抑制因子(NIF)变体、抑瘤素M变体、成骨蛋白变体、癌基因产物变体、甲状旁腺激素变体、PD-ECSF变体、PDGF变体、肽类激素变体、人生长激素变体、多效生长因子变体、蛋白A变体、G蛋白变体、致热外毒素A、B或C变体、松弛素变体、肾素变体、SCF/c-kit变体、可溶性补体受体I变体、可溶性I-CAM变体、可溶性白细胞介素受体变体、可溶性TNF受体的变异、生长调节素变体、生长抑素变体、生长激素变体、链激酶变体、超抗原变体、葡萄球菌肠毒素变体、SEA变体、SEB变体、SEC1变体、SEC2变体、SEC3变体、SED变体、SEE变体、类固醇激素受体变体、超氧化物歧化酶变体、中毒性休克综合征毒素变体、胸腺素α1变体、组织纤溶酶原激活物变体、肿瘤生长因子(TGF)变体、TGF-α变体、TGF-β变体、肿瘤坏死因子变体、肿瘤坏死因子α变体、肿瘤坏死因子β变体、肿瘤坏死因子受体(TNFR)变体、VLA-4蛋白变体、VCAM-1蛋白变体、血管内皮生长因子(VEGEF)变体、尿激酶变体、Mos变体、Ras变体、Raf变体、Met变体、p53变体、Tat变体、Fos变体、Myc变体、Jun变体、Myb变体、Rel、雌激素受体变体、孕酮受体变体、睾酮受体变体、醛固酮受体变体、LDL受体变体、炎性分子变体、信号转导分子变体、转录激活物变体、转录抑制物变体、透明质素变体、CD44变体和皮质酮变体。