[发明专利]表达生物治疗分子的治疗基因开关构建物和生物反应器以及它们的应用

权利要求书

1.一种治疗、缓解或预防对象中疾病、病症或病状的方法，包括：

(a)将以下多核苷酸引入所述对象：(1)编码基因开关的第一多核苷酸，所述基因开关包含至少一个转录因子序列，其中所述至少一个转录因子序列通过与治疗开关启动子操作性结合而编码配体依赖性转录因子复合物(LDTFC)，和(2)与因子调节的启动子操作性结合的编码治疗多肽或治疗多核苷酸的第二多核苷酸，该启动子由所述配体依赖性转录因子复合物活化，其中，引入所述第一和第二多核苷酸以表达所述配体依赖性转录因子复合物；和

(b)将配体给予所述对象以诱导所述治疗多肽或治疗多核苷酸表达。

2.一种在对象中表达治疗多肽或治疗多核苷酸的方法，包括：

(a)将以下多核苷酸引入对象：(1)编码基因开关的第一多核苷酸，所述基因开关包含至少一个转录因子序列，其中所述至少一个转录因子序列通过与治疗开关启动子操作性结合而编码配体依赖性转录因子复合物，和(2)与因子调节的启动子操作性相连的编码治疗多肽或治疗多核苷酸的第二多核苷酸，该启动子由所述配体依赖性转录因子复合物活化，其中，引入所述第一和第二多核苷酸以表达所述配体依赖性转录因子复合物；和

(b)将配体给予所述对象以诱导所述治疗多肽或治疗多核苷酸表达。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述治疗开关启动子是组成型的。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述治疗开关启动子在疾病、病症或病状相关条件下活化，从而在所述疾病、病症或病状相关条件下表达所述配体依赖性转录因子复合物。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述疾病、病症或病状对所述治疗多肽或治疗多核苷酸起反应。

6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述治疗多肽或治疗多核苷酸的表达和传播水平足以治疗、缓解或预防所述疾病、病症或病状。

7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述基因开关是基于蜕皮素受体(EcR)的基因开关。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述配体结合EcR配体结合结构域。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述配体是二酰基肼。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述配体选自：RG-115819、RG-115932和RG-115830。

11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述配体是酰氨基酮或噁二唑啉。

12.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述基因开关包含第一治疗开关启动子控制下的第一转录因子序列和第二治疗开关启动子控制下的第二转录因子序列，其中所述第一转录因子序列和所述第二转录因子序列编码的蛋白质相互作用从而形成起到配体依赖性转录因子复合物作用的蛋白质复合物。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述第一治疗开关启动子和所述第二治疗开关启动子不同。

14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述第一治疗开关启动子和所述第二治疗开关启动子相同。

15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述第一转录因子序列编码包含异二聚体伴侣和反式激活域的蛋白质。

16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述第二转录因子序列编码包含DNA结合结构域和配体结合结构域的蛋白质。

17.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将所述第一和第二多核苷酸引入所述对象的一个或多个修饰细胞中。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述修饰细胞是通过将所述第一和第二多核苷酸引入已从所述对象分离的细胞制备的，从而产生修饰的自体细胞，然后重新引入所述对象。

19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述修饰细胞是其中掺入了所述第一和第二多核苷酸的修饰的非自体(MNA)细胞。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述MNA细胞是所述对象的自体细胞。