[发明专利]改进的FRET探针及其应用

权利要求书

1.至少第一种和第二种分子探针的探针组，每种探针具有染料，其中所述染料合在一起允许能量转移，每种探针另外具有允许所述至少第一种和第二种探针并置的反应性基团，其中所述反应性基团是寡核苷酸，并且其中所述第一种探针的寡核苷酸反应性基团不与所述第二种探针的寡核苷酸反应性基团直接反应。

2.权利要求1的探针组，其中所述第一种和第二种探针的寡核苷酸反应性基团独立地选自脱氧核糖核苷酸(DNA)寡聚体，核糖核苷酸(RNA)寡聚体，锁核酸和肽核酸(PNA)寡聚体，优选其中所述第一种和第二种探针的寡核苷酸反应性基团是LNA或PNA寡聚体。

3.权利要求1或2的探针组，其中染料与寡核苷酸反应性基团结合。

4.权利要求1到3任一项的探针组，其中每个所述探针具有多个反应性基团。

5.权利要求1到4任一项的探针组，其中所述探针是抗体或功能上与其等价的结合片段。

6.权利要求1到5任一项的探针组，其中所述染料的至少一种是荧光染料。

7.权利要求6的探针组，其中所述荧光染料选自荧光素异硫氰酸酯(FITC)，四甲基罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)，德克萨斯红(TR)，R-藻红蛋白(R-PE)，别藻蓝蛋白(APC)，藻胆蛋白成员，花青染料例如Cy3、Cy5、Cy5.5或Cy7，Alexa Fluor染料，荧光素，LightCycler染料例如LCRed640或LCRed705，这些荧光染料的串联结合物，以及量子点染料。

8.提供权利要求1-7任一项的探针组的方法，包括将每种探针与适合的染料并与寡核苷酸反应性基团或其衍生物相接触，以在所述探针、所述染料和所述寡核苷酸之间形成结合物。

9.权利要求8的方法，包括将染料与寡核苷酸反应性基团结合。

10.用于检测细胞中融合蛋白的存在的方法，使用至少第一种和第二种分子探针的探针组，每种探针能够识别位于所述融合蛋白的融合区域相反一侧上的结合位点，方法包括下列步骤：

-提供权利要求1-7任一项的探针组；

-提供含有细胞的样品

-将所述样品与所述探针组接触，

-在允许所述探针在所述融合蛋白上并置的条件下

-将所述探针与桥接物质相接触，桥接物质含有能够特异性结合所述第一种探针的寡核苷酸反应性基团的至少一部分和能够特异性结合所述第二种探针的寡核苷酸反应性基团的至少一部分的核酸序列，以及

-通过FRET检测所述探针的并置，以确定所述融合蛋白的存在。

11.权利要求10的方法，其中所述融合蛋白是肿瘤特异性融合蛋白。

12.用于在细胞中检测至少两种相互作用分子的方法，所述方法使用至少第一种和第二种分子探针的探针组，每种探针包含能够特异性结合不同的目标相互作用分子的结合结构域，方法包括下列步骤：

-提供权利要求1-7任一项的探针组，

-提供含有细胞的样品，

-将所述样品与所述探针组在允许所述探针在所述相互作用分子上并置的条件下相接触

-将所述探针与桥接物质相接触，桥接物质含有能够特异性结合所述第一种探针的寡核苷酸反应性基团的至少一部分和能够特异性结合所述第二种探针的寡核苷酸反应性基团的至少一部分的寡核苷酸序列，以及

-通过FRET检测所述探针的并置，以检测所述相互作用分子。

13.权利要求12的方法，其中至少一种所述分子是蛋白质物质、核酸、脂类分子或糖类。

14.权利要求10-13任一项的方法，其中所述寡核苷酸反应性基团和桥接物质包括DNA、RNA、LNA或PNA序列，优选为LNA或PNA。

15.权利要求10到14任一项的方法，包括对所述样品的至少一种细胞标志物进行染色以确定靶细胞群，染色包括将所述样品与能够选择性结合所述细胞标志物的化合物相接触，其中所述细胞标志物优选为分化(CD)抗原簇。

16.权利要求10-15任一项的方法，包括在单细胞水平的FRET检测，优选使用流式细胞术。