[发明专利]异常型朊病毒蛋白结合剂和异常型朊病毒蛋白的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及异常型朊病毒蛋白结合剂和异常型朊病毒蛋白的检测方法。

背景技术

所谓的朊病毒病正成为严重的社会问题。作为该朊病毒病，已知的有传染性海绵状脑病(TSE)，例如羊瘙痒症(scrapie)、牛海绵状脑病(BSE)、克罗伊茨费尔特-雅各布病(CJD)等。

由各种证据可知，这些朊病毒病是由于感染性朊病毒蛋白(异常型朊病毒蛋白)(PrP^Sc)而引起的。

因此，为了避免人和动物传染朊病毒病、并确保医药品和食品的安全性，对试样中的感染性朊病毒蛋白(异常型朊病毒蛋白)的检测进行了各种尝试。

然而，人和动物在生物体内本来就具有不引起朊病毒病的非感染性朊病毒蛋白(正常型朊病毒蛋白)(PrP^C)。并且，令人惊奇的是，该正常型朊病毒蛋白与异常型朊病毒蛋白具有相同的氨基酸序列(一级结构)，其不同之处仅在于由相同的氨基酸序列所形成的高级结构。

通常，作为区分并检测两种蛋白质的方法，有使用能够区分这些蛋白质的特异性抗体的方法。然而，也许是因为如上所述氨基酸序列相同，至今也没有获得能够区分异常型朊病毒蛋白和正常型朊病毒蛋白的特异抗体。即，使用特异性抗体来检测试样中的感染性朊病毒蛋白(异常型朊病毒蛋白)的方法尚未有实用化的可能性。

因此，目前，异常型朊病毒蛋白的检测方法仅限于下面的大致2种方法。

一种方法为：将疑含有异常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒蛋白)的试样注入到试验动物的脑内，然后进行长时间的饲养，确认所得到的脑标本在神经病理学上的变化。

该方法虽然为能够信赖的方法，但令人遗憾的是，由于需要花费大量的时间和费用，因而除了作为各种检测方法的校准试验使用之外，尚未成为常用的检测方法。

另一种方法为使用蛋白酶K的方法。也许是因为其高级结构的原因，已知正常型朊病毒蛋白容易被蛋白酶K分解(敏感性)，另一方面，异常型朊病毒蛋白难以被蛋白酶K分解(耐受性)。因此，利用这种对于被蛋白酶K分解的敏感性(耐受性)的不同，例如，在蛋白酶K处理后，若能通过使用了多克隆抗体的免疫印迹法等检测到与处理前位置相同的条带，则判断蛋白质为异常型朊病毒蛋白，若对应的条带消失(没有检测到)，则判断为正常型朊病毒蛋白，从而能够进行检测。

使用了该蛋白酶K的检测方法目前正被广泛使用，并提出了许多变形(专利文献1：日本特开平10-267928号公报，专利文献2：日本特开平11-32795号公报，专利文献3：日本特开2003-121448号公报)。

然而，该方法必须进行酶处理，因而必须准备适于酶反应的条件，从这点来看非常繁杂，而且进行酶反应需要花费时间，其结果，在原理上存在迅速性和简易性不充分、作为试剂需要比较昂贵的酶等缺点。

专利文献1：日本特开平10-267928号公报

专利文献2：日本特开平11-32795号公报

专利文献3：日本特开2003-121448号公报

发明内容

发明要解决的问题

因此，要求一种能够简便、迅速且以高灵敏度定量地从正常型朊病毒蛋白中区分并检测出异常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K进行酶处理的方法。

即，本发明的目的在于提供一种能够简便、迅速且以高灵敏度定量地从正常型朊病毒蛋白中区分并检测出异常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K进行酶处理的方法；以及在该方法中使用的检测剂。

另外，为了在这种检测方法中使用，要求一种不与正常型朊病毒蛋白结合、而与异常型朊病毒蛋白特异性结合的试剂(结合剂)。

即，本发明的目的还在于提供一种不与正常型朊病毒蛋白结合、而与异常型朊病毒蛋白特异性结合的试剂(结合剂)。

用于解决问题的方案

本发明人等为了达到上述目的，对异常型朊病毒蛋白的特异性检测方法进行了深入研究，结果发现，属于来源于哺乳动物乳的蛋白质的乳铁蛋白，具有不与正常型朊病毒蛋白结合、而仅与异常型朊病毒蛋白特异性结合的性质，由此完成了本发明。

即，乳铁蛋白即为长久以来一直要求的、不与正常型朊病毒蛋白结合而与异常型朊病毒蛋白特异性结合的试剂(结合剂)，如果使用该乳铁蛋白，则能够从正常型朊病毒蛋白中区分并检测出异常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K进行酶处理。