[发明专利]杂合融合报道子及其应用

权利要求书

1.多个表达载体，包括：

第一个表达载体，其包含第一个多核苷酸，该多核苷酸包含与第一个融合蛋白的开放读框可操纵连接的启动子，所述第一个融合蛋白包含i)报道蛋白的片段，所述片段具有相应全长报道蛋白的至少50个连续氨基酸残基但是比其少至少50个氨基酸残基；以及ii)第一个异源氨基酸序列；

第二个表达载体，其包含第二个多核苷酸，该多核苷酸包含与第二个融合蛋白的开放读框可操纵连接的启动子，所述第二个融合蛋白包含iii)相对于报道蛋白功能不同的蛋白质的片段，所述片段具有相应全长功能不同的蛋白质的至少50个连续氨基酸残基但是比其少至少50个氨基酸残基，以及iv)第二个异源氨基酸序列，

其中报道蛋白片段的报道活性在功能不同的蛋白质片段的存在下增加，并且依赖于第一个和第二个异源氨基酸序列的相互作用。

2.权利要求1的多个载体，其中报道蛋白是突变卤代烷脱卤素酶，其稳定结合相应非突变卤代烷脱卤素酶的底物，其中突变卤代烷脱卤素酶在相应于红球菌卤代烷脱卤素酶的第106或者272位残基的氨基酸残基包含至少一个氨基酸取代。

3.权利要求2的多个载体，其中所述功能不同的蛋白质是珊瑚虫萤光素酶或者单加氧酶。

4.权利要求2的多个载体，其中突变卤代烷脱卤素酶的片段包含相应全长突变卤代烷脱卤素酶的C末端部分的至少50个直至250个连续氨基酸。

5.权利要求2的多个载体，其中所述突变卤代烷脱卤素酶片段的N末端相应于红球菌脱卤素酶中第73-103位残基区域中的残基。

6.权利要求1的多个载体，其中所述报道蛋白是生物发光酶或者水解酶。

7.权利要求1的多个载体，其中所述报道蛋白是甲虫萤光素酶，所述功能不同的蛋白质不是生物发光蛋白。

8.权利要求7的多个载体，其中所述功能不同的蛋白质是酰基-CoA连接酶，酰基-硫醇连接酶或者脂酰基-CoA合成酶。

9.权利要求1的多个载体，其中所述报道蛋白质是Oplophorus萤光素酶，所述功能不同的蛋白质不是生物发光蛋白质。

10.测试分子相互作用的测定或者可以改变分子相互作用的物质或条件，包括单独融合于分子结构域的功能不同的蛋白质的片段，其中分子结构域的相互作用通过重建至少一个所述独立的蛋白质的活性而检测。

11.权利要求10的测定，其中所述功能不同的蛋白质是珊瑚虫萤光素酶和突变卤代烷脱卤素酶，或者甲虫萤光素酶和酰基-CoA连接酶、酰基-硫醇连接酶，或者脂酰基-CoA-合成酶，或者Oplophorus萤光素酶和亲脂转运蛋白质、视黄醇结合蛋白、脂肪酸结合蛋白，或者FABP-样蛋白质家族中非生物发光蛋白质。

12.测试分子相互作用的方法，包括：

a)提供第一个融合蛋白，其包含第一个蛋白质的片段与第一个异源氨基酸序列；

b)提供第二个融合蛋白，其包含相对于第一个蛋白质功能不同的蛋白质的片段及选择的第二个异源氨基酸序列，所述第二个异源氨基酸序列与第一个异源氨基酸序列相互作用或可疑与其相互作用；

c)使第一个和第二个异源氨基酸序列互相接触；

d)检测得自第一个和第二个异源氨基酸序列的相互作用的第一个蛋白质或第二个蛋白质的活性。

13.权利要求12的方法，其中第一个蛋白质是突变卤代烷脱卤素酶，其稳定结合相应非突变脱卤素酶的底物或者是生物发光酶。