[发明专利]分离胚悬浮细胞团的方法

说明书

背景

植物的无性繁殖，对于某些物种来说，已经被显示能够产生大量遗传一致的胚，每个胚都具有发育成正常植株的能力。这样的胚通常在实验室条件下进一步培养，直到它们达到自养的“秧苗”阶段，其特征是能够通过光合作用为它们自己生产食物，抗干燥，产生能够穿透土壤的根，以及抵挡土壤微生物。某些研究人员已经实验了生产被称为人造种子的人工种子，其中将单个植物的体细胞胚或合子胚包裹在种皮中。这样的人造种子的例子公开在授权给Carlson等的美国专利No.5,701,699中，其公开内容在此明确引为参考。

胚悬浮细胞团(“ESM”)被用于培养随后插入到人造种子中的胚。当前的体细胞胚发生包括进行性维持和栽培具有各种不同细胞团尺寸和类型的混合物的ESM。本公开的发明人已经发现，来自ESM的小的、通常单个的细胞，一般比起较大的细胞具有更高的产率。也就是说，小的细胞倾向于具有存活和最终萌发成健康植株或树木的较高比率。

目前可用的用于尺寸分离的方法包括被动地将细胞培养物倾倒在筛网或成组的嵌套筛网上。另一种目前可用的方法是基于密度的离心，其中将细胞培养物放置在含有分离介质例如Percoll或Ficoll的试管中。将试管离心，以根据密度分离细胞。

尽管这些用于尺寸分离的方法是有效的，但它们不是没有自身的问题。一个非限制性的例子是，这些方法通常使细胞受到污染。此外，当包括离心作为密度分离的一部分时，离心机经常引起细胞的剪切和压实损伤。

因此，对于能够以相对低的成本可靠地分离ESM，并最小化ESM的损伤或污染风险的分离ESM的方法，存在着需求。

发明简述

提供本简述以简化的形式介绍将在下面的详细描述中进一步描述的筛选概念。本简述不打算鉴定所要求权利的主题的关键特点，也不打算用于帮助确定所要求权利的主题的范围。

提供了分离胚悬浮细胞团的方法。方法包括提供胚悬浮细胞团培养物，其中含有大量第一种尺寸的第一种颗粒以及大量第二种尺寸的第二种颗粒，该第二种尺寸至少部分与第一种颗粒的第一种尺寸不同。方法还包括将胚悬浮细胞团培养物悬浮在流体中以产生混合物，并在维持流体中的混合物的同时迫使混合物通过滤器，以将第一种颗粒与第二种颗粒分离开。

附图说明

通过参考下面的详细描述，同时结合参考附图，本发明的上述方面以及许多伴随的优点将变得更好理解，在这些图中：

图1是根据本公开的一个实施方案构建的过滤装置的等比例视图(isometric view)；

图2是人造种子的横截面侧视平面图；

图3是图1的过滤装置的分解等比例视图；以及

图4是图1的过滤装置的横截面等比例视图。

详细描述

参考图1，可以最好地看见根据本公开的一个实施方案构建的过滤装置120。过滤装置120可以适当改造，以包含在用于培养在人造种子的构建中使用的胚的自动化组件中。可选地，这样的过滤装置120被适当地改造，单独作为独立的组件，以收获胚或用于培养胚的培养物，以备插入到熟知的人造种子中。

为了清楚起见以及作为背景，参考图2描述了人造种子20的结构。人造种子20包括cylcap 22，种皮24，营养介质26例如配子体，以及封死(dead)的末端密封物28。种皮24适合由一段管状材料形成。在一个实施方案中，种皮24是纤维材料例如纸的分节段的管。管的节段可以在适合的涂层材料例如蜡中预处理。

Cylcap 22，也称为限制物，由硬度强得足以抵抗被萌发的胚刺穿或断裂的多孔材料适当制造，例如陶质或瓷制材料，并包括末端密封部分30和子叶限制部分32。子叶限制部分32与末端密封部分30适合地形成为整体或单位。Cylcap 22还包括纵向延伸的腔34，延伸通过末端密封部分30并部分通过子叶限制部分32的一个末端。腔34的尺寸可以在其中容纳植物胚42。

在某些实施方案中，当cylcap 22由多孔材料适当制造时，可能需要用阻隔物材料对cylcap 22进行涂层，以降低水的损失率和限制或减少微生物的进入。这样的阻隔物包括蜡、聚氨基甲酸酯、釉料、指甲油，以及由Airproducts销售的涂料Airflex 4514。