[发明专利]包含具有差别密码子偏性的重复编码序列的杆状病毒载体

权利要求书

1.一种含有编码第一氨基酸序列的第一核苷酸序列和编码第二氨基酸序列的第二核苷酸序列的昆虫细胞，其中所述第一和第二氨基酸序列包含一段在所述第一和第二氨基酸序列之间具有至少90％氨基酸同一性的至少100个氨基酸的共同氨基酸序列，其中编码所述第一和第二氨基酸序列中的共同氨基酸序列的核苷酸序列的同一性小于90％，其中所述第一核苷酸序列编码细小病毒Rep52或40蛋白的氨基酸序列，所述第二核苷酸序列编码细小病毒Rep78或68蛋白的氨基酸序列，并且其中所述共同氨基酸序列包含细小病毒Rep52或40蛋白的从第二个氨基酸到C末端最后一个氨基酸的氨基酸序列。

2.根据权利要求1的昆虫细胞，其中所述第一和第二氨基酸序列中的共同氨基酸序列具有至少99％的氨基酸同一性，优选地具有100％的氨基酸同一性。

3.根据权利要求1或2的昆虫细胞，其中在所述第一核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列相对于在所述第二核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列具有改进的对所述昆虫细胞的密码子使用偏性，或者其中在所述第二核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列相对于在所述第一核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列具有改进的对所述昆虫细胞的密码子使用偏性。

4.根据权利要求3的昆虫细胞，其中在所述第一和第二核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列之间的密码子适应指数的差值至少为0.2。

5.根据前述权利要求任一项的昆虫细胞，其中在所述具有改进的密码子使用偏性的核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列包含至少25个全部为依照表1或表2的常见密码子的密码子连续延伸。

6.根据权利要求5的昆虫细胞，其中在所述具有改进的密码子使用偏性的核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列中的全部密码子都是符合表1或表2的常见密码子，并且其中优选地，在另一核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列中的全部密码子都是依照表1或表2的次最常见密码子。

7.根据权利要求1-5任一项的昆虫细胞，其中在所述第二核苷酸序列中编码所述共同氨基酸序列的核苷酸序列中的至少50％的密码子相对于所述第一核苷酸序列中相应的密码子被改变以使所述第二核苷酸序列中的AT或GC含量最大化。

8.根据前述权利要求任一项的昆虫细胞，其中所述第一和第二核苷酸序列是一个核酸构建体的一部分，其中所述第一和第二核苷酸序列每个都与用于昆虫细胞表达的表达控制序列可操作地连接。

9.根据权利要求8的昆虫细胞，其中所述第一和第二核苷酸序列是单个核酸构建体的一部分。

10.根据前述权利要求任一项的昆虫细胞，其中所述细小病毒Rep蛋白是腺相关病毒(AAV)Rep蛋白。

11.根据权利要求10的昆虫细胞，其中所述第一和第二核苷酸序列编码的细小病毒Rep蛋白为相同的血清型。

12.根据权利要求1-11任一项的昆虫细胞，其中所述第一核苷酸序列编码一种细小病毒Rep52蛋白，并选自：

a)一段编码一种包含与SEQ ID NO.6的氨基酸序列具有至少50％序列同一性的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；

b)一段与SEQ ID NO.1-5和10的任一个的核苷酸序列具有至少50％序列同一性的核苷酸序列；

c)一段其互补链与(a)或(b)的核酸分子序列杂交的核苷酸序列；和

d)一段由于遗传密码的简并性而序列与(c)的核酸分子的序列不同的核苷酸序列，

并且其中所述第二核苷酸序列编码一种细小病毒Rep78蛋白，并选自：

a)一段编码一种包含与SEQ ID NO.8的氨基酸序列具有至少50％序列同一性的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；

b)一段与SEQ ID NO.7的11-1876位的核苷酸序列具有至少50％序列同一性的核苷酸序列；

c)一段其互补链与(a)或(b)的核酸分子序列杂交的核苷酸序列；

d)一段由于遗传密码的简并性而序列与(c)的核酸分子的序列不同的核苷酸序列。