[发明专利]关于使用阳离子脂质体介导的核酸递送产生免疫应答的方法

说明书

发明背景

发明领域

本发明在药物递送且特别地基于阳离子脂质体的疫苗领域中。在实施方案中，本发明提供了制备用于递送分子以诱导针对病毒抗原的免疫应答或者治疗或预防病毒疾病的配体靶向的(例如，抗体或抗体片段靶向的)脂质体的方法。递送系统的特异性得自靶向性配体。

发明背景

疫苗代表针对可高度传播的感染性病原体的强大武器，并且在过去一个世纪中已用于显著减少感染性疾病的负担。然而，由感染性疾病造成的对全球健康的威胁并未后退，而是已变成全国和全球优先考虑的事情。病毒病原体例如结核和疟疾的影响继续在全球规模上感受到，并且新出现的病原体例如HIV/AIDS、SARS冠状病毒和最近出现的大流行性流感或‘禽流感’病毒对公共卫生提出新挑战。

大多数疫苗技术涉及灭活的疫苗制剂、基于蛋白质亚单位或在性质方面活减毒的。例如，关于流感疫苗的目前生产和制造技术基于鸡蛋接种并且仍是时间和成本密集过程。其为活减毒病毒的天花疫苗与免疫妥协群体中的严重不利事件相关。因此，目前的疫苗技术是过时的并且不足以满足关于疫苗的全国或全球需求。

因此，存在开发新疫苗技术的迫切需要，所述新疫苗技术将解决由高度易变和新出现的病原体造成的挑战。本发明通过提供基于阳离子脂质体的药物递送系统满足了这些需要，所述药物递送系统用于在诱导针对抗原的免疫应答中使用以及用于治疗或预防患者中的病毒疾病。

发明概述

在一个实施方案中，本发明提供了制备配体靶向的(例如，蛋白质/肽靶向的、抗体或抗体片段靶向的)阳离子脂质体的方法。在合适的实施方案中，此种方法包括制备配体(例如，转铁蛋白、半乳糖、L-37pA、抗体或抗体片段)，并且使配体与阳离子脂质体混合，以形成配体靶向的阳离子脂质体。适当地，配体与阳离子脂质体直接结合/复合，但不与阳离子脂质体化学缀合。在其他实施方案中，配体可以与阳离子脂质体化学缀合。随后，配体靶向的阳离子脂质体与编码一种或多种病毒蛋白质的一种或多种核酸分子，和/或编码一种或多种白介素的一种或多种核酸分子混合，以形成配体靶向的阳离子脂质体复合物。在合适的实施方案中，使用抗体片段，例如，Fab片段、或单链Fv片段，例如抗转铁蛋白受体单链Fv(TfRscFv)。在进一步的实施方案中，该方法可以进一步包括使配体靶向的阳离子脂质体与包含K[K(H)KKK]5-K(H)KKC(HoKC)(SEQ ID NO：1)肽的肽混合。

适当地，配体(例如，蛋白质/肽、抗体或抗体片段)与阳离子脂质体以约1∶1至约1∶100、适当地约1∶10至约1∶50(w∶w)、更适当地约1∶20至约1∶40范围的比混合。在示例性实施方案中，阳离子脂质体包含二油酰基三甲基磷酸铵(DOTAP)与二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)和/或胆固醇(chol)的混合物；或双十八烷基二甲基溴化铵(DDAB)与二油酰基磷脂酰乙醇胺和/或胆固醇的混合物。

核酸适当地以约0.1摩尔编码一种或多种病毒蛋白质的一种或多种核酸分子比约10摩尔编码一种或多种白介素的一种或多种核酸分子；至约10摩尔编码一种或多种病毒蛋白质的一种或多种核酸分子比约0.1摩尔编码一种或多种白介素的一种或多种核酸分子的摩尔比存在。例如，可以利用约1摩尔编码一种或多种病毒蛋白质的一种或多种核酸分子比约1摩尔编码一种或多种白介素的一种或多种核酸分子的比。在示例性实施方案中，阳离子免疫脂质体与编码一种或多种病毒蛋白质的一种或多种核酸分子、和编码一种或多种白介素的一种或多种核酸分子，以约1∶1至约1∶40(μg总核酸∶μg脂质体)、适当地约1∶5至约1∶20(μg总核酸∶μg脂质体)，例如约1∶10(μg总核酸∶μg脂质体)的重量比混合。

可以由核酸分子编码的病毒蛋白质例子包括但不限于，选自下述的病毒蛋白质：HIV病毒蛋白质，流感病毒蛋白质，甲型、乙型或丙型肝炎病毒蛋白质、SARS病毒蛋白质，禽流感病毒蛋白质，埃博拉病毒蛋白质，西尼罗病毒蛋白质，和天花病毒蛋白质。可以由核酸分子编码的白介素例子包括但不限于，选自IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18和IL-23的白介素。在合适的实施方案中，核酸编码IL-2、IL-12和IL-15。本发明还提供了通过本发明的各种方法制备的阳离子免疫脂质体复合物。