[发明专利]一种抑制酪氨酸酶基因表达的siRNA及组合物和应用

说明书

技术领域

本发明是关于一种用于抑制酪氨酸酶基因表达的siRNA及含有该 siRNA的化妆品组合物和该siRNA在制备用于抑制或祛除黑色素生成和沉 积的化妆品组合物中的应用。

背景技术

(1)关于黑色素

黑色素(melanin)是由黑素细胞合成的一种生物多聚体，由皮肤、毛囊、 虹膜和视网膜的黑色素细胞产生。当受到紫外线等因素刺激时，黑素细胞能 够大量的合成黑色素生物合成所必需的酪氨酸酶，在酪氨酸酶的催化下酪氨 酸转化成多巴醌，多巴醌进一步氧化形成多巴色素，最后形成黑色素。

黑色素可分为两类，一是真黑色素，不含硫原子，呈棕色或黑色；二是 脱黑色素，含硫原子，呈黄色或微红棕色。动物与人的皮肤和毛发颜色与黑素 体的数目，大小，和分布等都有直接的关系。过量的黑色素会使皮肤变黑， 而非均匀分布的黑色素会导致黄褐斑和祛斑的产生。

黑色素是由多个基因相互协调并经过一系列复杂的生理生化过程合成， 这些与色素沉着相关的基因参与黑色素的合成、运输和分布。其中，酪氨酸 酶基因就是黑色素生物合成的过程中的一个极为重要的基因，因此，通过 RNA干扰而专一性地抑制酪氨酸酶基因的表达，从而沉默酪氨酸酶基因的 活性，是抑制黑色素合成、改善皮肤颜色的有效途径。

(2)关于RNA干扰技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double-stranded  RNA，dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应基因的表达或使该基因沉默的 过程。RNA干扰技术又被形象地称为基因敲低(knock-down)或基因沉默 (gene silencing)，是一种典型的转录后基因调控方法，又称转录后基因沉默 (post-transcriptional gene silencing，PTGS)。最早有关RNA干扰的报道出 现在1990年，由两个不同的研究小组同时报道了转基因植物中的RNA干扰 现象，以后又在线虫、果蝇、斑马鱼和小鼠等几乎所有真核生物中观察到了 RNA干扰现象。1999年，Hamilton和Baulcombe在发生RNA干扰的植物 中检测到了长度为21-25个核苷酸的RNA片段，这些RNA片断被证明是 RNA干扰所必需的，称为小分子干扰RNA(siRNA)。双链siRNA与细胞源 性的相关酶和蛋白质形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing  complex，RISC)。在RNA干扰过程中，双链siRNA中的正义链被排除出复 合体，反义链指导RISC结合到靶mRNA的相应位点，然后由复合物中的核 糖核酸酶III降解靶mRNA，从而关闭靶基因的表达。

由于RNA干扰是针对转录后阶段的基因沉默，相对于传统的基因治疗 方法如反义核酸技术或转入没有功能的突变体与该基因竞争，整个流程的设 计更简便，且作用迅速，效果明显。RNA干扰的这种特点为基因治疗开辟 了新的，有力的工具。

例如，US2005/0137151A1公开了一种用于治疗色素沉着的组合物，该 组合物含有一种或多种用于抑制酪氨酸酶基因表达的siRNA，所述siRNA 为具有下列核苷酸序列的siRNA中的一种或几种：

C1)5’-UAGGACCUGCCAGUGCUCUdTdT-3’

3’-dTdTAUCCUGGACGGUCACGAGA-5’；

C2)5’-UCCUGGAAACCAUGACAAAdTdT-3’

3’-dTdTAGGACCUUUGGUACUGUUU-5’；

C3)5’-CACACCUGUCUUUGUCUUAdTdT-3’

3’-dTdTGUGUGGACAGAAACAGAAU-5’。

但是，该siRNA存在的问题是，对酪氨酸酶基因表达的抑制活性较低。

因此，开发一种对酪氨酸酶基因表达的抑制活性较高的siRNA成为目前 迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的第一个目的是克服现有的siRNA对酪氨酸酶基因表达的抑制 活性较低的缺点，提供一种对酪氨酸酶基因表达的抑制活性较高的siRNA。

本发明的第二个目的是提供一种用于抑制黑色素生成和沉积或祛除黑 色素的化妆品组合物。

本发明的第三个目的是提供一种siRNA在制备用于抑制黑色素生成和 沉积或祛除黑色素的化妆品组合物中的应用。