[发明专利]超表达重组霍乱毒素B亚单位的霍乱弧菌显示双重免疫原性

说明书

相关申请的交叉引用

本专利申请要求2007年4月24日提交的第60/926,123号美国临时专利申请的优先 权。

发明领域

本发明涉及用于递送抗原以在哺乳动物体内激发对抗霍乱弧菌(Vibrio cholerae)和产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的免疫应答的活减毒细菌载体。本发明公开了提供 中和霍乱弧菌和大肠杆菌抗原两者的中和抗体应答的免疫原性组合物。

背景技术

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)被认为是发展中国家传染性腹泻的主导因素之一(参 见，Black，Rev.Infect.Dis.，12Suppl1：S73-9(1990))。全世界范围内的ETEC感染发生率 估计造成6.5亿例的腹泻和38万例的小于5岁儿童的死亡(Gaastraetal.，Trends Microbiol.，4(11)：444-52(1996))。ETEC也是旅行者腹泻的重要原因，在旅行至墨西哥 (Adachietal.，J.Infect.Dis.，185(11)：1681-3(2002)；Jiangetal.，J.Infect.Dis.， 185(4)：497-502(2002)；Bouckenoogheetal.，J.Travel.Med.，9(3)：137-40(2002))、非 洲(Wolfetal.，J.Clin.Microbiol.，31(4)：851-6(1993))、孟加拉国(Qadrietal.， J.Clin.Microbiol.，38(1)：27-31(2000))、和印度尼西亚(Oyofoetal.， Am.J.Trop.Med.Hyg，65(2)：120-4(2001))的地方流行性区域的人群中多达全部病例的 60％由ETEC负责。ETEC常与驻亚洲(Serichantalergsetal.，J.Clin.Microbiol.，35(6)： 1639-41(1997))和中东地区(Wolfetal.，1993，supra)的美国军事人员的腹泻爆发事件 有关。虽然ETEC感染通常具自限性，并可用抗生素治疗，但ETEC感染还是能负面地影响感染 者的生活质量，常常在恢复正常活动之前需要几天的时间。对于部署在较不发达国家的军 事人员以及在ETEC流行的国家旅行的度假者来说，这尤其值得关注。

大部分ETEC病例是由于摄入了肠病原体感染的食物和饮料。摄入后，ETEC在诸多 定居因子的协助下定居在上部肠道。一旦感染建立，ETEC分泌热不稳定肠毒素(LT)，或热稳 定肠毒素(ST)或同时分泌两者。虽然这些毒素从抗原性来说是不同的，并结合不同的宿主 受体，但两者都引起剧烈的水样腹泻产生。其他症状可以包括肠道痉挛、恶心，和偶尔地，更 加严重的症状，如呕吐和发烧。在每年报导的750万到1000万旅行者腹泻病例中，大约200万 是由表达LT的ETEC引起的(Steffen，R.，Clin.Infect.Dis.，41Suppl.(8)：S536-40 (2005))。

ST是一种小的、单体毒素，含有多个半胱氨酸残基，其二硫键为这些毒素热稳定性 的原因。ST有两个不相关的类别，其结构和作用机理不同。两类毒素的基因都主要存在于质 粒上，一些ST-编码基因也在转座子中找到。

LT是一种原型A-B型毒素，由效应子亚单位(LT-A)和细胞结合亚单位(LT-B)组成。 LT-A通过激活宿主腺苷酸环化酶造成超生理水平的cAMP而使宿主上皮细胞中毒。LT-B形成 五聚体复合物，其与LT-A非共价相互作用形成LT全毒素，LT全毒素与GM₁神经节苷脂结合， 所述GM₁神经节苷脂与宿主细胞表面的脂膜筏相关(Hirst，Choleratoxinand Escherichiacoliheat-labileenterotoxin，in：TheComprehensiveSourcebookofBacterialProteinToxins，AloufandFreer，eds.(SanDiego，AcademicPress，1999)， pp.104-29)。一旦LT结合到宿主细胞并被内吞，LT-A将被运送到细胞质，在那里发挥毒性作 用，引起氯化物、重碳酸盐和水分排出细胞以及自肠道的净液体丢失。

下表1显示从全球不同地理区域的旅行者身上分离出来的表达LT和ST的ETEC菌株 的发生率