[发明专利]FTO(2-氧化戊二酸依赖的加氧酶)活性的测定方法

权利要求书

1.一种测试FTO活性的方法，所述方法包括监测FTO多肽的加氧酶活性。

2.如权利要求1所述的方法，其中将氧用作辅底物。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中将铁用作辅因子。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中将2-氧化酸用作辅底物。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将2-氧化戊二酸用作辅底物。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在还原剂的存在下监测加氧酶活性。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述还原剂是抗坏血酸盐或其类似物、硫醇或膦。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在底物的存在下测定加氧酶活性。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述底物是肽或核酸底物。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述FTO多肽是重组多肽。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述FTO多肽包含：

(a)SEQ ID NO：1的氨基酸序列；或

(b)与SEQ ID NO：1的氨基酸序列在其全长有至少40％同一性的氨基酸序列。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述与SEQ ID NO：1的氨基酸序列在其全长有至少40％同一性的氨基酸序列是人类FTO的天然存在的变体或来自除人之外其它物种的FTO的同源物。

13.如权利要求11或12所述的方法，其中所述与SEQ ID NO：1的氨基酸序列在其全长有至少40％同一性的氨基酸是SEQ ID NO：2至SEQID NO：11中任一项所示的氨基酸序列。

14.前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括：

(i)使FTO多肽与测试试剂接触；

(ii)在测试试剂的存在下监测加氧酶活性；和

(iii)确定所述测试试剂是否是FTO活性的抑制剂或激活剂。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述测试试剂是除FTO之外的2-OG加氧酶的已报导的抑制剂，或所述抑制剂的类似物或变体。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述2-OG加氧酶是前胶原脯氨酰或赖氨酰羟化酶、缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶、包括组蛋白去甲基化酶在内的甲基化赖氨酰去甲基化酶、天冬氨酰羟化酶、磷脂酰丝氨酸受体(Jmjd6)、AlkB或人类AlkB同源物和/或赤霉素C-20氧化酶。

17.如权利要求15或16所述的方法，其中所述抑制剂是N-草酰氨基酸如N-草酰甘氨酸或其衍生物、甘氨酸或丙氨酸衍生物、2-氧化酸类似物、类黄酮或类黄酮衍生物如染料木黄酮。

18.如权利要求14～17中任一项所述的方法，其中所述测试试剂在FTO活性位点与2-OG或FTO底物竞争，和/或在FTO活性位点结合金属。

19.如权利要求14～18中任一项所述的方法，其中所述测试试剂包含金属离子。

20.如权利要求14所述的方法，其中所述测试试剂是还原剂。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述还原剂是除FTO之外的2-OG加氧酶的已报导的激活剂。

22.如权利要求20或21所述的方法，其中所述还原剂是抗坏血酸盐或抗坏血酸盐的类似物或者硫醇类还原剂，例如二硫苏糖醇或膦化学族的成员。

23.如权利要求14～22中任一项所述的方法，所述方法还包括：使用除FTO之外的酶重复所述方法的步骤；和确定所述测试试剂是否选择性抑制或激活FTO或其它酶。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述除FTO之外的酶是2-OG加氧酶。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述2-OG加氧酶是缺氧诱导因子羟化酶，如脯氨酰或天冬氨酰羟化酶、胶原或前胶原脯氨酰羟化酶、核酸去甲基化酶如AlkB同源物、或者蛋白去甲基化酶如三甲基、二甲基或单甲基赖氨酸或精氨酸残基去甲基化酶。