[发明专利]分子的糖基化

权利要求书

1.产生目标蛋白的改变的N-糖基化形式的方法，所述方法包括：

提供解脂西洋蓍霉细胞，所述细胞经遗传工程化而包含N-糖基化活性的至少两种修饰；所述至少两种修饰包括OCH1活性缺乏和野生型解脂西洋蓍霉MNN4多肽的过表达；

和向细胞中引入编码目标蛋白的核酸，其中所述细胞以改变的糖基化形式产生所述目标蛋白。

2.权利要求1的方法，其中至少70％的目标蛋白分子包含改变的N-糖基化，且其中所述至少70％的目标蛋白分子的改变的N-糖基化包含在所述目标蛋白分子上的N-聚糖的磷酸化。

3.权利要求1或2的方法，还包括分离所述目标蛋白的改变的N-糖基化形式。

4.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白是外源蛋白。

5.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白是内源蛋白。

6.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白是哺乳动物蛋白。

7.权利要求6的方法，其中所述目标蛋白是人蛋白。

8.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白是病原体蛋白、溶酶体蛋白、细胞因子、抗体或其抗原结合片段，或融合蛋白。

9.权利要求8的方法，其中所述融合蛋白是病原体蛋白、溶酶体蛋白、或细胞因子与抗体或其抗原结合片段的融合物。

10.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白为生长因子或趋化因子，或生长因子或趋化因子与抗体或其抗原结合片段的融合物。

11.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白是与溶酶体贮积病(LSD)相关的蛋白质。

12.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白是葡糖脑苷酯酶，α-半乳糖苷酶或半乳糖脑苷酯酶。

13.权利要求1或2的方法，其中所述目标蛋白选自下组：α-L-艾杜糖苷酸酶、β-D-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-己糖胺酶、β-D-甘露糖苷酶、α-L-岩藻糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶A、α-N-乙酰半乳糖胺酶、天冬氨酰葡糖胺酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、α-氨基葡糖苷-N-乙酰转移酶、β-D-葡糖醛酸酶、透明质酸酶、α-L-甘露糖苷酶、α-神经氨酸酶、磷酸转移酶、酸性脂肪酶、酸性神经酰胺酶、鞘磷脂酶、硫酯酶、组织蛋白酶K和脂蛋白脂肪酶。

14.权利要求1或2的方法，其中所述改变的N-糖基化形式包括一种或多种N-聚糖结构。

15.权利要求14的方法，其中所述目标蛋白的改变的N-糖基化形式是均质的。

16.权利要求14的方法，其中含有改变的糖基化的改变的目标分子之部分是至少20％。

17.权利要求14的方法，其中含有改变的糖基化的改变的目标分子之部分是至少30％。

18.权利要求14的方法，其中含有改变的糖基化的改变的目标分子之部分是至少40％。

19.权利要求14的方法，其中含有改变的糖基化的改变的目标分子之部分是至少50％。

20.权利要求14的方法，其中含有改变的糖基化的改变的目标分子之部分是至少75％。

21.权利要求14的方法，其中含有改变的糖基化的改变的目标分子之部分是至少90％。