[发明专利]基于肉毒毒素的神经毒成分供应温度-稳定性固体肌肉松弛剂的方法

说明书

技术领域

本发明提供一种在高温下供应肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉 松弛剂为包含不含复合蛋白的肉毒毒素神经毒成分的干固体组合物。

背景技术

肉毒毒素由细菌梭状芽孢杆菌产生。肉毒毒素有七种抗原不同的 血清型，即A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。肉毒毒素通常以 复合物，即负责肉毒毒素毒性的亚单元(即所称的“神经毒成分”)与 其他细菌蛋白复合在一起形成的毒素复合物的形式，从裂解的梭状芽 孢杆菌培养物中释放出来。该复合物的分子量从约300,000Da至约 900,000Da不等。复合蛋白为，例如，各种血凝素。这种毒素复合物 的蛋白本身没有毒性，但被认为能为神经毒成分提供稳定性，并能导 致肉毒杆菌口服中毒。与毒素复合物不同，神经毒成分以其分离和提 纯形式，即不含任何复合梭菌蛋白的形式存在，其为不稳定酸并且对 胃肠道中的侵蚀性环境不耐受。

肉毒毒素复合物的神经毒成分最初形成为单链多肽，在血清型A 的情况下分子量约为150kDa。在另一种血清型中，观察到神经毒成 分的分子量根据细菌的来源在约145kDa和170kDa间变化。在血清 型A的情况下，例如，多肽的酶解加工产生了一种以双链多肽形式 存在的活性多肽，该双链多肽由通过二硫键连接的重链和轻链组成。 在人体中，重链介导内毒毒素与突触前的胆碱能神经末梢相结合并将 毒素内转进入细胞内。轻链被认为具有毒性效应，起锌-肽链内切酶 的作用并切割负责膜融合的特异性蛋白(SNARE复合物)(参见例如 Montecucco C1 Shiavo G.，Rosetto O：The mechanism of action of tetanus and Botulinum neurotoxins.Arch Toxicol.1996；18(Suppl.)： 342-354))。

通过干扰细胞内的膜融合过程，肉毒毒素阻止乙酰胆碱释放进入 突触间隙。肉毒毒素在神经-肌肉接头处的总效应是阻断神经-肌肉间 的传导，并在实际上，使肌肉去神经。肉毒毒素对其他周边胆碱能神 经突触也有活性，造成流涎或出汗减少。

本申请将肉毒毒素复合物的神经毒亚单元称为“神经毒成分”或 “不含复合蛋白的神经毒成分”。

本发明中通篇使用的术语“肉毒毒素”或“肉毒毒素类”，不仅指不 含任何其他梭菌蛋白的神经毒成分，也指“肉毒毒素复合物”：当毒素 复合物与神经毒成分不必或不要求有区别时，在本发明中使用术语 “肉毒毒素”。复合物通常含有其他的，所谓的“无毒蛋白”，我们将称 之为“复合蛋白”或“细菌蛋白”。

“BoNT”或“NT”为常用的缩写，涉及不含复合蛋白的肉毒毒素的 NT化合物。

尽管有毒性作用，肉毒毒素复合物已被用作许多疾病的治疗药 物。1989年A型肉毒毒素在美国获准可供人类使用以治疗斜视、眼 睑痉挛以及其他疾病。A型肉毒毒素蛋白复合物可市购获得，例如， 以商标名BOTOX(Allergan Inc.)或以商标名DYSPORT(Ipsen Ltd)。 用于治疗应用的复合物可直接注入需治疗的肌肉。在生理pH值下， 毒素从蛋白复合物中释放出来并产生所需的药效。

在施予病人之前，一般是直接肌肉内注射至受影响的肌肉之前， 将所述组合物溶于生理盐水中。

关于基于肉毒毒素的组合物和药物剂量，以及基于肉毒毒素的神 经毒成分的药物组合物、剂量和给药频率，可参阅US 60/817756。

除了上述功能，据推测复合蛋白还能保护肉毒毒素的神经毒成分 免受严酷的环境条件的影响，因为神经毒成分对降解和/或失活高度 敏感，特别是当经受短期温度应力时，例如在温暖到炎热的气候或通 常在夏季期间。

为此，在过去一般会采取极为谨慎的措施以防止基于肉毒毒素， 特别是基于肉毒毒素的神经毒成分的药物的温度达到4℃以上，例如 接近20℃。大多数情况下，将装有含有肉毒毒素的干固体组合物的 药瓶在冰上或至少在冰箱(约4℃)中冷冻贮存(约-20℃)。这种必 需的冷却意味着在供应药物时会产生额外的费用。

鉴于上述情况，本发明人对基于肉毒毒素的肌肉松弛剂的温度稳 定性进行了研究。令人惊讶的是，发现肉毒毒素的神经毒成分与现有 技术相比，呈现了显著的意想不到的温度稳定性。

发明内容