[发明专利]双特异性抗体及其制造方法

权利要求书

1.一种用于产生双特异性抗体的体外方法，所述方法包括如下步骤：

a)提供具有第一结合特异性的第一抗体，其中所述第一抗体包含 IgG4 CH3区或SEQ ID NO：19的CH3区，其中292位的Lys(K)已被Arg(R) 取代，

b)提供具有不同于所述第一结合特异性的第二结合特异性的第二抗 体，其中所述第二抗体包含IgG4 CH3区或SEQ ID NO：19的CH3区，其 中292位的Lys(K)已被Arg(R)取代，

c)在允许核心铰链区中的半胱氨酸发生二硫键异构化的还原条件下共 同温育所述第一和第二抗体，和

d)获得双特异性抗体，

其中核心铰链区及CH3区外部的序列属于选自下组的同种型：IgG1、 IgG2、和IgG3。

2.权利要求1的体外方法，其中所述第一抗体在核心铰链区中包含CPPC 序列。

3.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述第一抗体包含IgG4-样核心 铰链区。

4.权利要求1或3中任一项的体外方法，其中所述第一抗体是在核心铰链 区中包含CSPC、CPSC、CRPC、CPRC、CGHC或CPHC序列的抗体。

5.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述第二抗体在核心铰链区中 包含CPPC序列。

6.权利要求1-4中任一项的体外方法，其中所述第二抗体包含IgG4-样核心 铰链区。

7.权利要求1-4或6中任一项的体外方法，其中所述第二抗体是在核心铰链 区中包含CSPC、CPSC、CRPC或CPRC序列的抗体。

8.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述第一抗体和/或所述第二抗 体是人类抗体。

9.前述权利要求中任一项的体外方法，其中对步骤c)中的条件进行选择， 使核心铰链区之外不发生显著的二硫桥还原或异构化。

10.前述权利要求中任一项的体外方法，其中步骤c)包括添加还原剂。

11.前述权利要求中任一项的体外方法，其中步骤c)包括添加从下组选出的 作用剂：谷胱甘肽、L-半胱氨酸、二硫苏糖醇、β-巯基乙醇和半胱胺。

12.前述权利要求中任一项的体外方法，还包括使步骤c)中获得的组合物处 于非还原性条件下，以便停止进一步的半分子交换的步骤。

13.前述权利要求中任一项的体外方法，还包括使双特异性抗体稳定化的步 骤。

14.权利要求13的体外方法，其中所述使双特异性抗体稳定化的步骤是化 学交联铰链区中半胱氨酸的方法。

15.权利要求13的体外方法，其中所述使双特异性抗体稳定化的步骤是化 学交联半分子上碳水化合物侧链的方法。

16.权利要求13的体外方法，其中所述使双特异性抗体稳定化的步骤是交 联CH3区中不对称地引入的半胱氨酸的方法。

17.前述权利要求中任一项的体外方法，还包括纯化双特异性抗体的步骤。

18.权利要求17的体外方法，包括在非还原性条件下实施纯化双特异性抗 体的步骤。

19.前述权利要求中任一项的体外方法，还包括将所得的双特异性抗体配制 成用于治疗应用的药物组合物的步骤。

20.前述权利要求中任一项的体外方法，其中第一抗体具有针对肿瘤细胞或 肿瘤细胞蛋白的结合特异性。

21.权利要求20的体外方法，其中第一抗体具有针对erbB1、erbB2、erbB3、 erbB4、MUC-1、CD19、CD20、CD38、CD4或CXCR5或针对CD79a或 CD79b的结合特异性。

22.权利要求1-19中任一项的体外方法，其中第一抗体具有针对病原微生物 的结合特异性。