[发明专利]肾损伤的诊断试验

说明书

本申请是基于2007年3月21日提交的美国临时专利申请流水号No.60/919,277的非临时申请，本申请要求该临时专利申请的优先权，将其全部内容援引并入本文。

技术领域

本发明涉及针对哺乳动物中新近发生过(recently occurred)或正在进行(ongoing)的、正在影响肾脏并可能导致急性肾衰竭(acute renal failure，ARF)，以下也同义地称为急性肾功能障碍(acute renal dysfunction，ARD)的损伤性(injurious)过程的诊断和监测。因此，本发明与内科学，特别是危重症医学或重症监护医学相关，也与其中实施可能损伤肾脏的程序的手术、肿瘤学和诊断性成像相关。本发明还与兽医学和手术，以及肾病理生理学和对实验动物肾有害影响的研究相关。

背景技术

本发明涉及一种在血液和尿中都有出现的肾病理学上的新标志分子用于检测显著的肾损伤的存在的诊断用途，肾损伤在下文中从对人类或哺乳动物肾脏的组成细胞的损伤的意义上来使用，包括但不限于肾小管细胞损伤。所述标志分子是中性粒细胞明胶酶相关脂笼蛋白(neutrophilgelatinase-associated lipocalin，NGAL)，也称为中性粒细胞脂笼蛋白(NL；对于人中性粒细胞脂笼蛋白为HNL)、脂笼蛋白2(LCN2)、25-kDa α2-微球蛋白相关蛋白(在大鼠中)或者24P3(在小鼠中)。在大鼠中，其也称为neu相关脂笼蛋白(NRL)，因为它的基因在neu(HER2/c-erbB-2)癌基因引发的乳腺肿瘤中过表达(Stoesz and Gould，1995)。NGAL是一种25-kDa的糖蛋白，最初是从嗜中性多形核白细胞的颗粒中分离的(Triebel et al.，1992；Kjeldsen et al.，1993)。它包含一个二硫桥，而且形成一定比例的二聚体和更小比例的三聚体。被分泌的总的NGAL中有一部分与92-kDa人中性粒细胞IV型胶原酶(也称为基质金属蛋白酶9(MMP-9)或明胶酶B)结合，或者作为NGAL单体形成约115kDa的复合物(Monier et al.，2000；Yan et al.，2001)，或者作为NGAL二聚体形成约125kDa的复合物(Yan et al.，2001)。已在多种癌症包括前列腺癌、膀胱癌、肾癌和乳腺癌的患者的尿中鉴别出这些复合物。

NGAL最初是作为一种中性粒细胞激活标志为人所知的，当入侵微生物(尤其是化脓性细菌)引起中性粒细胞脱颗粒和颗粒蛋白胞吐时，NGAL被释放到血液中。据此，人们认为，在来自人体的血清样品中测得NGAL水平提高则说明该个体正在经受炎症过程，特别是由细菌感染引起的炎症过程(美国专利6,136,526；PCT申请WO95/29404)。关于这一点，NGAL(24P3)在小鼠中被鉴定为一种1型急性期蛋白，在急性期反应期间表达主要定位在肝中(Liu and Nilsen-Hamilton，1995)，但这是与NGAL特异性地来自中性粒细胞的主张相矛盾的。

美国专利申请2004/0219603公开了NGAL用作尿生物标记，用来检测肾小管细胞损伤的早期发作。美国专利申请2005/0272101公开了血清中的NGAL用于同样目的。但这两个公开文件都没有描述怎样将肾小管细胞损伤与可导致NGAL水平上升的全身性炎症、或细菌感染、或癌症区分开来。本发明人先前已提交了PCT申请WO2006/066587，其公开了怎样将尿或血浆或血清中的NGAL水平分成不是肾损伤诊断特征的较低的上升，以及是肾损伤诊断特征的较高的上升：通过定义上述液体中NGAL的截止水平(cutoff level)，NGAL的测量结果必须超过截止值方可作为导致ARF或ARD的肾损伤的诊断特征。WO2006/066587(其全部内容通过引用并入本申请)考虑到这样一个事实，即在炎症、感染和某些癌症中，体液中的NGAL水平也可能上升，但通常上升到的值比与导致ARF或ARD的肾损伤相关的值要低。但少数有严重感染和/或患有癌症的患者即使在收治期间不发生肾损伤，也可能显示出超过用于诊断肾损伤的截止值的NGAL水平；而少数患者即使其NGAL水平不超过截止值，也发生较小程度的ARD。当利用截止值时，这两种类型的疑似病例(borderline cases)可分别导致假阳性的肾损伤诊断或者假阴性的无肾损伤诊断。

本发明的目的在于提供一种可靠的方法，来在不依靠利用给定体液中NGAL浓度的截止值的条件下，区分由于肾损伤引起的体液中NGAL增加和由于非肾脏性原因引起的体液中NGAL增加。