[发明专利]增加细菌内多肽表达的修饰的分泌系统

权利要求书

1.枯草芽胞杆菌细菌宿主细胞，其包含编码来自芽孢杆菌属物种的异 源截短的SecG的异源多核苷酸，其中所述异源截短的SecG的氨基酸序列 如SEQ ID NO：11所示，其中与不表达所述异源截短的SecG的相应细菌 宿主细胞对所需的分泌多肽的分泌相比，所述细菌宿主细胞中所述异源截 短的SecG的表达能够增加所述细菌宿主细胞对所述所需的分泌多肽的分 泌。

2.权利要求1的细菌宿主细胞，其中所述异源多核苷酸替换了所述细 菌宿主细胞的内源SecG的编码基因。

3.权利要求1的细菌宿主细胞，其中所述异源多核苷酸补充了所述细 菌宿主细胞的内源SecG的编码基因。

4.权利要求1的细菌宿主细胞，其中所述截短的SecG包含全长SecG 多肽的N-端前39个氨基酸。

5.权利要求1的细菌宿主细胞，其中所述截短的SecG来自克劳氏芽 孢杆菌。

6.在枯草芽孢杆菌细菌宿主细胞中生产所需的分泌多肽的方法，其包 括：

(a)在所述细菌宿主细胞中表达来自芽孢杆菌属物种的异源截短的 SecG多肽，其中所述异源截短的SecG的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所 示，和

(b)生产所述所需的分泌多肽，其中，与不表达所述异源截短的SecG 的相应细菌宿主细胞生产的所述所需多肽的量相比，所述异源截短的SecG 能够增加所述细菌宿主细胞产生的所述所需的分泌多肽的量。

7.权利要求6的方法，其中所述异源截短的SecG是由替换了所述宿 主细胞的内源SecG基因的截短的基因编码的。

8.权利要求6的方法，其中所述异源截短SecG多肽包含全长SecG 多肽的前39个氨基酸。

9.权利要求6的方法，其中所述所需的分泌多肽是细菌的碱性丝氨酸 蛋白酶。

10.权利要求9的方法，其中所述细菌的碱性丝氨酸蛋白酶是SEQ ID  NO：26的碱性丝氨酸蛋白酶。

11.权利要求6的方法，其中所述细菌宿主细胞不表达内源SecG蛋 白质。

12.权利要求6的方法，其中所述细菌宿主细胞表达内源SecG。

13.权利要求6的方法，其还包括回收所述所需的分泌多肽。

14.权利要求6的方法，其中所述截短的SecG来自克劳氏芽孢杆菌。

15.权利要求6的方法，其中缺失了所述细菌宿主细胞的内源SecG 基因。

16.权利要求1的细菌宿主细胞，其中所述所需的分泌多肽是酶。

17.权利要求16的细菌宿主细胞，其中所述酶是丝氨酸蛋白酶。

18.权利要求1的细菌宿主细胞，其中所述所需的分泌多肽选自SEQ  ID NO：25-29、36和38的蛋白酶。

19.权利要求1的细菌宿主细胞，其中缺失了所述细菌宿主细胞的内 源SecG基因。