[发明专利]筛选方法

说明书

技术领域

1本发明涉及细胞凋亡和蛋白质的Bcl-2家族。具体地，本发明涉 及筛选调控细胞存活和/或细胞凋亡和/或蛋白质的Bcl-2家族成员的 水平和/或活性的分子的方法。

背景技术

2本说明书中作者引用的出版物的参考书目集中于说明书的末尾。

3本说明书对任何之前出版物(或从其衍生的信息)，或任何已知的 事物的引用，不是并且也不应该看作是之前出版物(或从其衍生的信 息)，或公知常识的已知事物形式为本说明书所涉及到的努力方面的承 认或供认或任何形式的暗示。

4多细胞有机体的存活依赖于各种细胞类型的正确和协调功能。发 育的起始阶段，有机体的活力依赖于细胞在各种组织中的选择和分化。 在后来的阶段，有机体的维持需要特定的细胞适应性。例如，血液细 胞不断地从血液前体(hematologic precursor)更新。淋巴细胞或生殖 细胞应答于即时需要显示快速的增殖。另一方面，神经细胞显示受限 的更新能力，许多神经元在个体的一生中存活和持续。对于各种细胞 类型，细胞数量的控制为细胞增殖和细胞死亡间平衡的结果。

5细胞死亡的一种过程为细胞凋亡。细胞凋亡，或程序化细胞死亡， 为有机体处置受损的、不想要的或不需要的细胞的正常方法。然而有 时，例如当有机体患病时，身体一种或更多细胞类型的细胞凋亡速率 受影响。例如，导致过多或过少细胞自杀的细胞凋亡的异常调节，可 能是人类中此类各种疾病例如癌症、AIDS、阿耳茨海默氏病和类风湿 性关节炎的原因。

6在过去的20年里细胞凋亡的分子调节已被详细地表征，并且已 经发现通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(半胱氨酸天冬氨酸蛋白 酶(caspases))来实施。调节细胞凋亡的一种主要途径为Bcl-2蛋白家 族途径，其在调节发育上的程序化和胁迫诱导的细胞死亡上发挥中心 作用。该家族的一个亚类，包括蛋白质Bcl-2，Bcl-x_L，Bcl-w，Mcl-1， Al和Bcl-B，促进细胞存活。这些蛋白维持细胞的存活直到它们的 活性通过直接结合促凋亡家族成员，例如蛋白Bim，Bad或Bid来降 低或中和。促存活蛋白的该精密生化作用是有争议的，尽管它们可能 控制第二类促凋亡家族成员(多结构域蛋白Bax和Bak)的作用。这些 蛋白在可能通过破坏细胞内膜例如线粒体外膜来介导细胞凋亡上，发 挥关键作用，从而参与促凋亡(pro-apoptogenic)因子例如细胞色素 c释放入细胞质以促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶激活，所述细胞色素 c正常的被隔离在细胞器内。

7由于过量和受损的细胞凋亡表征许多疾病或不需要的状况，存在 对于调控细胞凋亡和/或蛋白质的Bcl-2家族成员的分子的需要。

发明内容

8本说明书中的各实施方式加以必要的修正后适用于每一其它实 施方式，除非另外指出。

9因此，在一个方面本发明提供筛选调节细胞的细胞凋亡的分子的 方法，包括：

i)将所述分子与所述细胞组合(combining)；

ii)鉴定所述细胞的Bcl-2家族蛋白的调节；

其中Bcl-2家族蛋白的调节指示所述分子调节所述细胞的细胞凋 亡。在优选的实施方式中，所述分子降低细胞凋亡。

10在另一方面本发明提供筛选调节细胞的Bcl-2家族蛋白的分子 的方法，包括

i)将所述分子与所述细胞组合；

ii)鉴定所述细胞的细胞凋亡是否受调节；

其中所述细胞凋亡的调节指示所述分子调节Bcl-2家族蛋白。在 优选的实施方式中，所述分子降低细胞凋亡。

11在又一方面，本发明提供筛选降低细胞的细胞凋亡的分子的方 法，包括：

i)将候选分子与检测细胞组合；和

ii)确定相对于对照在所述分子的存在下所述检测细胞的存活上 的变化。

12在某些实施方式中本发明的方法在步骤i)和ii)之前或之间还包 括处理细胞以诱导细胞凋亡的步骤。所述细胞可以用降低Bcl-2蛋白 家族的促存活(pro-survival)成员，例如Bcl-x_L和/或Mcl-1的水平 和/或活性的试剂来处理。在某些实施方式中所述细胞用降低或增强 Bcl-2家族的促凋亡活(pro-apoptotic)成员，例如Bak和/或Bax的 水平和/或活性的试剂来处理。