[发明专利]新颖的天冬酰胺酶变体及其用途

权利要求书

1.具有天冬酰胺酶活性的亲本多肽的变体，其中，所述变体的氨基酸序列在与SEQ ID NO：3所示的序列进行比对时，所述变体的氨基酸序列包含对应于第63位氨基酸的氨基酸残基的至少一种取代，所述位置参照SEQ ID NO：3来定义，其中，所述亲本多肽的序列如SEQ ID NO：3所示。 

2.权利要求1所述的变体，其中，所述变体的氨基酸在与SEQ ID NO：3所示的序列进行比对时，所述变体的氨基酸序列包含第63位的Gly或Val或Ser，所述位置参照SEQ ID NO：3来定义。 

3.权利要求1所述的变体，其中所述变体的序列如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6中任一个所示。 

4.权利要求1-3中任意一项所述的变体，在相同pH下测量时，其具有比所述亲本多肽更高的比活性。 

5.权利要求4所述的变体，所述变体的比活性至少在一个pH下比在相同pH下测量的所述亲本多肽高。 

6.权利要求4所述的变体，所述变体的比活性至少在一个4和8之间的pH下，比在相同pH下测量的所述亲本多肽高。 

7.权利要求1-3中任意一项所述的变体，其中，所述变体具有比所述亲本多肽更高的pH最优值。 

8.权利要求1-3中任意一项所述的变体，其还包含对并非权利要求1所定义的那些氨基酸残基的一个或多个取代。 

9.权利要求8的变体，其包含1至5个另外的取代，所述另外的取代并非权利要求1所定义的。 

10.核酸序列，其编码权利要求1-9中任意一项所述的变体。 

11.核酸构建体，其包含权利要求10所述的核酸序列，所述核酸序列与能指导天冬酰胺酶在合适的表达宿主中表达的一种或多种控制序列可操作地连接。 

12.重组表达载体，其包含权利要求11所述的核酸构建体。 

13.重组宿主细胞，其包含权利要求12所述的表达载体。 

14.生产天冬酰胺酶的方法，所述方法包括在有益于生产所述天冬酰胺酶的条件下培养权利要求13所述的宿主细胞，以及回收所述天冬酰胺酶。 

15.生产天冬酰胺酶多肽变体的方法，所述方法包括： 

a)选择亲本天冬酰胺酶多肽； 

b)取代对应于位置63的至少一个氨基酸残基，所述位置参照SEQ ID NO：3来定义，并且其中，所述亲本多肽的序列如SEQ ID NO：3所示； 

c)任选地，对对应于第41、53、62、64、66、70、71、73、74、76、77、88、90、91、101、102、103、104、106、107、108、109、111、119、122、123、132、140、142、143、145、161、162、163、164、168、169、170、195、211、213、214、215、216、217、218、219、220、228、232、233、234、235、262、267、268、269、270、271、272、273、293、295、297、298、299、300、301、302、303、304、310、314、317、318、319、321、323、324、325、327、328、329、330、331、332、333、334、335或371位氨基酸中任何的一个或多个另外的氨基酸进行取代，所述位置参照SEQ ID NO：3来定义，并且其中，所述亲本多肽的序列如SEQ ID NO：3所示； 

d)制备从步骤a)-c)产生的变体； 

e)测定所述变体的pH最优值和/或在至少一个pH下的比活性； 

以及 

f)选择较之所述亲本天冬酰胺酶多肽而言在至少一个pH下具有增加的比活性和/或较之所述亲本天冬酰胺酶多肽而言具有增加的pH最优值的变体，由此产生天冬酰胺酶多肽变体。 

16.权利要求15的方法，其中，所述亲本天冬酰胺酶多肽的序列如SEQ ID NO：3所示。