[发明专利]通过过表达戊糖磷酸途径的酶在棒状细菌中生产甲硫氨酸的方法

权利要求书

1.在棒状细菌中生产甲硫氨酸的方法，包括如下步骤：

培养通过遗传修饰衍生自起始生物体的至少一种棒状细菌，所述棒状 细菌与起始生物体相比显示出戊糖磷酸途径的至少一种酶的量和/或活性增 加。

2.权利要求1的方法，其中与起始生物体相比，至少转酮醇酶、转醛 醇酶、葡萄糖-6-磷酸-脱氢酶或者6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶的量和/或活性增 加。

3.权利要求1或2的方法，其中与起始生物体相比，至少转酮醇酶和 葡萄糖-6-磷酸-脱氢酶、转酮醇酶和6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶或者葡萄糖-6- 磷酸-脱氢酶和6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶的量和/或活性增加。

4.权利要求3的方法，其中与起始生物体相比，至少转酮醇酶、葡萄 糖-6-磷酸-脱氢酶和6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶的量和/或活性增加。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述酶的量和/或活性是通过增加 编码所述酶的核酸序列的拷贝数、增加编码所述酶的核酸序列的转录和/或 翻译、在编码所述酶的核酸序列中导入突变、或者这些措施的组合而增 加。

6.权利要求5的方法，其中基因拷贝数通过使用包含编码所述酶的核 酸序列的自主复制载体而增加，和/或通过将编码所述酶的核酸序列的额外 拷贝经染色体整合进起始生物体的基因组中而增加。

7.权利要求5的方法，其中转录通过使用强启动子而增加。

8.权利要求7的方法，其中所述强启动子选自P_EFTu、P_groES、P_SOD和 P_λR。

9.权利要求8的方法，其中使用启动子P_SOD。

10.权利要求7的方法，其中通过用强启动子优选P_SOD置换其各自的 内源启动子，转酮醇酶和6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶的量和/或活性与起始生物 体相比增加。

11.权利要求5的方法，其中转酮醇酶在相应于SEQ ID No.12的293 或者327位置具有至少一个突变，以及6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶在相应于 SEQ ID No.6的150、209、269、288、329、330或者353位置具有至少一 个突变。

12.权利要求10和11的方法，其中通过用强启动子优选P_SOD置换其各 自的内源启动子，转酮醇酶和6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶的量和/或活性与起始 生物体相比增加，其中转酮醇酶在相应于SEQ ID No.12的293或者327 位置具有至少一个突变，6-磷酸-葡糖酸-脱氢酶在相应于SEQ ID No.6的 150、209、269、288、329、330或者353位置具有至少一个突变。

13.权利要求1-12任一项的方法，其中所述棒状细菌选自谷氨酸棒杆 菌、醋谷氨酸棒杆菌、杰氏棒杆菌(Corynebacterium jeikeum)、嗜醋酸棒状 杆菌(Corynebacterium acetoacidophilum)、热产氨棒状杆菌 (Corynebacterium thermoaminogenes)、栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)和Corynebacterium effiziens。

14.权利要求13的方法，其中使用谷氨酸棒杆菌菌株。

15.权利要求1-14任一项的方法，其中与起始生物体相比产生多至少 大约2％、至少大约5％、至少大约10％、至少大约20％、优选至少大约 30％、至少大约40％、至少大约50％以及更优选至少大约2倍、至少大约 5倍以及至少大约10倍的甲硫氨酸。

16.棒状细菌，其中所述棒状细菌通过遗传修饰衍生自起始生物体，由 此所述棒状细菌显示与起始生物体相比戊糖磷酸途径的至少两种酶的量和/ 或活性增加。