[发明专利]生物分子检测方法及生物分子检测用芯片

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用可与生物分子结合的电化学活性物质(氧化还原试剂)电化学检测生物分子的方法以及用于该方法的生物分子检测用芯片。

本申请要求2007年2月6日提出的日本国专利申请2007-27222号申请的优先权，该申请的内容全部引用于本申请中。

背景技术

近年来，在医疗、食品卫生、环境保护的领域中，要求能够低成本且简便快速地分析基因或蛋白质等的生物分子的技术。现有技术中，广泛利用使用荧光试剂的生物分子传感器，其中，包括DNA传感的光学检测法。但是，在该技术中，需要使用昂贵的荧光试剂或荧光检测机构，因此，不能抑制成本增大，而且，需要进行控制在固相上固定目标生物分子的捕捉分子而进行的前处理以及固相反应，因而，有不能进行简便快速的分析的问题。

另一方面，已提出了使用可与生物分子结合的电化学活性物质(氧化还原试剂)电化学检测生物分子的方法以及用于该方法的生物分子检测用芯片。该电化学检测法，不需要昂贵的试剂，反应操作也比较简便，因而，期待其在POC(即时检验(Point of care))领域的应用。

在专利文献1中，记载了一种检测试样溶液中的基因的方法，其是通过在试样溶液中添加对双链DNA特异结合的电化学活性试剂，测定其电化学应答(溶液电阻的变化)而进行检测的方法。更详细地，作为电化学活性试剂(氧化还原试剂)使用烟酸己可碱33258(Hoechst33258)(小型凹槽结合物(miner groove binder))，制作在包含对象基因的被检试样中添加有电化学活性试剂以及基因结合反应用试剂的混合溶液，比较该混合溶液的基因合成反应前的电阻和基因合成反应后的电阻，由此，即使是低浓度包含目标基因的试样溶液，也能够确实地检测目标基因。

专利文献1：专利第3511596号公报

发明内容

发明要解决的课题

但是，上述的专利文献1中记载的基因检测方法中，采用进行基因合成反应(核酸扩增反应)前的混合溶液的电化学测定和基因合成反应后的电化学测定，然后比较各自的测定结果的操作顺序(参照专利文献1第0026段)，因此，需要准备两套贵重的试样或昂贵的试剂，增大了成本，而且，在刚一进行制备用于基因合成反应的混合溶液时反应就有可能进行的等温合成反应体系中，例如NASBA(核酸序列依赖性扩增(Nucleic Acid Sequence BasedAmplification))法、ICAN法(等温的和嵌合引物起始的核酸扩增(Isothermaland Chimeric Primer initiated Amplification of Nucleic Acids))、LAMP法(环媒恒温扩增(Loop mediated Isothermal Amplification))等中，基因合成反应前的混合溶液并非一直不变，在该情形下，在基因合成反应前后的测定结果的比较中，不能进行正确的判断。另外，上述的专利文献1中记载的基因检测方法中，由于混合溶液中含有的杂质等导致在测定电化学应答的传感器部等中产生异常，在该情形下，由于不能从测定结果检测出异常，因而也不能进行可靠性高的基因检测。

本发明，是考虑上述实情而做出的发明。本发明的目的是，提供一种能够低成本且可靠性高的进行电化学检测生物分子的方法以及用于该方法的生物分子检测用芯片。

解决课题的方法

对于上述要解决的课题进行锐意研究的结果是，本发明人发现，通过比较含有电化学活性物质不含有生物分子的基准溶液和电化学活性物质与生物分子反应后的被检溶液之间的电化学应答，能够与上述现有技术同样地进行生物分子的检测，另外，在进行刚一进行制备混合溶液时反应就有可能进行的等温合成反应(NASBA法、ICAN法、LAMP法)的情形，也能够进行正确的比较，从而，完成了本发明。