[发明专利]甘油糖脂脂肪酶

说明书

技术领域

本发明涉及甘油糖脂脂肪酶、产生该脂肪酶的丝状菌、从丝状菌的培养物中分离精制该脂肪酶的方法、编码该脂肪酶的DNA和该脂肪酶的制造方法等。具体地说，本发明涉及特别适合在食品工业和医药品工业中使用的该脂肪酶、特别是来自丝状菌日本曲霉(Aspergillus japonicus)的甘油糖脂脂肪酶、产生该脂肪酶的丝状菌、从丝状菌的培养物中分离精制该脂肪酶的方法、编码该脂肪酶的DNA和该脂肪酶的制造方法、使用该脂肪酶的面包制造方法等。 

背景技术

〔1〕糖脂脂肪酶 

已知植物和微生物产生将甘油糖脂水解的脂肪酶。来自植物的酶主要具有水解甘油磷脂和甘油糖脂的能力，但其水解中性脂肪、尤其是水解甘油三脂的能力极低。已知还有来自微生物中的放线菌、细菌和霉菌的脂肪酶。来自放线菌和细菌的脂肪酶具有在水解甘油糖脂的同时还水解甘油磷脂的性质。已知来自丝状菌的脂肪酶水解中性脂肪、甘油磷脂和甘油糖脂。在本说明书中，甘油糖脂脂肪酶是指具有将甘油糖脂水解成溶血甘油糖脂和脂肪酸的活性(下文中称为“甘油糖脂分解活性”)的酶。双半乳糖二酰基甘油分解活性(下文中称为“DGDG分解活性”)是包括在甘油糖脂分解活性中的概念。另外，在本说明书中，“相对分解活性”是指，以在活性最高的pH或温度条件下的DGDG分解活性或卵磷脂分解活性为100％时，在各pH或温度条件下的DGDG分解活性或卵磷脂分解活性各自的相对值。另外，在本说明书中，“相对残存分解活性”是指，以在各pH或温度条件下处理后活性最高的pH或温度条件下的DGDG分解活性或卵磷脂分解活性为100％时，在各pH或温度条件下处理后的各 pH或温度条件下的DGDG分解活性或卵磷脂分解活性各自的相对值。 

作为来自细菌的对甘油糖脂进行水解的脂肪酶，例如已知有来自棒杆菌(Cornebacterium efficiens)、褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)等的脂肪酶(专利文献1)。 

作为来自放线菌的对甘油糖脂进行水解的脂肪酶，例如已知有来自链霉菌(Streptomyces sp.)的脂肪酶(专利文献1)。 

作为来自霉菌的对甘油糖脂进行水解的脂肪酶，例如已知有来自镰孢霉(Fusarium venenatum)、硫色镰刀菌(Fusarium sulfureum)、黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀霉(Fusariumu oxysporum)、贝克莱枝顶孢菌(Acremonium berkeleyanum)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)等的脂肪酶(专利文献2～4)。 

〔2〕甘油脂质 

甘油糖脂主要存在于革兰氏阳性细菌和高等植物叶绿体中。甘油糖脂是1，2-二酰基甘油的3位上以共价键的形式结合有糖链的化合物。作为糖链包括半乳糖等，其组成比例根据来源而不同。例如甘油糖脂包括单半乳糖二酰基甘油(下文中称为“MGDG”)和双半乳糖二酰基甘油(下文中称为“DGDG”。)等。 

甘油磷脂广泛分布在动物、植物、菌类中。甘油磷脂是在1，2-二酰基甘油的3位上以共价键的形式结合有磷酰基碱的化合物。作为碱包括胆碱、乙醇胺、丝氨酸、肌醇和甘油等，其组成比例根据来源而不同。例如甘油磷脂包括卵磷脂等。 

中性脂肪也广泛分布在动物、植物、菌类中。中性脂肪是单酰基甘油、二酰基甘油、三酰基甘油的总称。 

〔3〕卵磷脂或者甘油糖脂的酶处理 

卵磷脂或者甘油糖脂在分子中具有2个疏水性的脂肪酸，其作为亲油性的表面活性剂而被熟知。利用脂肪酶将其中一个脂肪酸水解来增加亲水性，变成具有与卵磷脂或者甘油糖脂不同的性质的物质。实际上使磷脂酶作用于卵磷脂而生成的溶血卵磷脂是水溶性的，作为食品添加物 使用时，由于所得到的食品的物性与卵磷脂不同，因而在食品工业中的应用仍在研究中。 

甘油糖脂通过甘油糖脂脂肪酶也部分发生水解，由此能够产生溶血甘油糖脂。溶血甘油糖脂也成为亲水性增加的物质。例如，溶血甘油糖脂包括双半乳糖甘油一酯(下文中称为“DGMG”)等。 

〔4〕甘油糖脂脂肪酶在食品中的使用 

如果使用甘油糖脂脂肪酶，则可以如下图所示那样在水的存在下由甘油糖脂产生溶血甘油糖脂。 

甘油糖脂                            溶血甘油糖脂