[发明专利]从乳中提取蛋白质的方法

权利要求书

1.一种用于乳中所存在的因子VII的提取方法，包括以下步骤：

a）由正zeta电势的玻璃过滤器撇取和脱脂该乳，

b）在允许所述因子VII在层析载体上被捕获的pH值下，将包含所述因子VII 的脱脂和撇取后的馏分转移到层析载体上，在该层析载体上，嫁接有同时为疏水的和 离子的4-巯基-乙基-吡啶配体，所述pH值高于4.6，

c）洗脱该因子VII，

d）通过从所洗脱馏分中去除乳蛋白质来纯化该在洗脱馏分中的因子VII，以及

e）回收所述因子VII。

2.根据权利要求1所述的方法，特征在于，在步骤a）的撇取和脱脂步骤之后， 并且步骤b）之前，进行乳澄清步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，特征在于，所述乳澄清步骤通过加入一定浓度 的螯合剂进行，该螯合剂与所述乳混合之后，乳的胶束结构消失，获得澄清乳。

4.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，在步骤a）的撇取和脱脂步骤之 后，并且在步骤b）之前，酪蛋白亚基簇被沉淀。

5.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，包括洗脱所述因子VII的步骤c） 使用浓度在1.2到8M之间的尿素、浓度在25mM和50mM之间的氨基乙酸。

6.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，包括洗脱所述因子VII的步骤c） 使用酸性pH值在4和6之间的水溶液的混合物。

7.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，包括洗脱所述因子VII的步骤c） 使用含水混合物包括从以下组中选择出的组分：磷酸钠和乙二醇，其中磷酸钠浓度在 5mM和50mM之间；柠檬酸钠和乙二醇，其中柠檬酸钠的浓度在5mM和50mM之间； TRIS/NaCl及钙盐、和乙二醇，其中TRIS/NaCl及钙盐的浓度在1mM和10mM之间； 辛酸钠和乙二醇，其中辛酸钠的浓度在10mM和100mM之间。

8.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，包括洗脱所述因子VII的步骤c） 使用一含水混合物，其与存在的混合物相关联的传导率低于3mS/cm。

9.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，包括洗脱所述因子VII的步骤c） 使用水。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括洗脱所述因子VII的步骤c） 使用混合物为以下组中的两种或三种：磷酸钠和乙二醇，其中磷酸钠浓度为30mM； 柠檬酸钠和乙二醇，其中柠檬酸钠的浓度为30mM；TRIS/NaCl及钙盐、和乙二醇， 其中TRIS/NaCl及钙盐的浓度为5mM；辛酸钠和乙二醇，其中辛酸钠的浓度为30mM。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述的水为注射用再蒸馏水。

12.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，步骤d）通过阴离子交换体层 析进行。

13.根据权利要求12所述的方法，特征在于，在步骤d）中，因子VII的洗脱使 用1mM到50mM的钙离子溶液进行。

14.根据权利要求1所述的方法，特征在于，所述因子VII为活化因子VII。

15.连接有一同时具有疏水性的和离子的4-巯基-乙基-吡啶配体的载体的用途， 用于提取存在于被撇取和脱脂过的乳中的因子VII，其中所述撇取和脱脂过的乳是通过 使用正zeta电势的玻璃过滤器获得的。