[发明专利]含醣基广谱癌症标志物

说明书

技术领域

本发明涉及能够区别癌症细胞或组织与正常细胞或组织的并存在于许多人体肿瘤中的蛋白质标志物，特别是涉及所熟知的癌症标志物CA215含醣基的抗原决定簇，以及使用此种抗原决定簇的方法。

背景技术

所引用的美国专利US5,650,291，描述了对肿瘤相关抗原，即CA215的分离，CA215存在于一个卵巢肿瘤的细胞株中，也存在于许多人体肿瘤中。针对此抗原已制备出单克隆抗体其中包括RP215。产生这种单克隆抗体的杂交瘤细胞株已经存放在美国标准生物品收藏中心，编号为ATCCHB 10095。在美国专利US5,650,291中已经描述，通过SDS凝胶电泳，被RP215识别的CA215最小分子量为60kD，而在聚集状态下其分子量范围为100kD至2,000kD。应用免疫亲和层析纯化方法，能够从培养的OC-3-VGH卵巢肿瘤细胞株提取物或培养液上清中纯化出CA215。CA215抗原是细胞膜相关的可溶性抗原，在卵巢癌病人和子宫颈癌病人血清中用RP215可以检测出来，而在正常组织中却没有发现这种抗原。Lee，C.Y.G.，et al.，在Cancer Immunol.Immunother.(1992)35：19-26.上叙述了这种抗原以及识别这种抗原的单克隆抗体，在这篇文章中，CA215被命名为“COX-1”。

Lee，G.，等人.，在J.Clin.Ligand Assay(2006)29：47-51上发表的文章，曾经报道在中性环境下经过高碘酸钠处理CA215后，用RP215抗体与其进行免疫夹心试验，结果发现CA215的免疫活性被消除了。作者由此得出结论，与RP215反应的CA215抗原决定簇可能包含醣基。

文章指出，在大约60％的癌症中存在能够被RP215识别的CA215抗原决定簇，详细内容参见Lee，G.，et al.，J.Clin.Ligand Assay(2006)supra。

美国专利US5,650,291还进一步描述了含CA215抗原肿瘤的定位方法，利用抗CA215抗体与之发生免疫反应，进而标识产生这种抗原的细胞。同时也描述了利用各种放射性同位素或毒素标记抗CA215的单克隆抗体，用于治疗。

本发明更详细地阐述并论证，抗原决定簇的醣基部分位于免疫球蛋白重链样分子的可变区，CA215的这一有效组分可用于制作疫苗，或用于制备和纯化抗体以进行癌细胞靶向定位。本发明同时证明CA215以两种形态存在，一种是在细胞膜上，另一种是分泌形式。

发明内容

本发明涉及CA215抗原决定簇的必要组份。这个抗原决定簇包括醣基以及至少一部分免疫球蛋白重链样可变区的氨基酸序列。这个抗原决定簇能够与RP215单克隆抗体发生特异性免疫反应，但不会与抗人IgG发生明显的免疫反应。

另一方面，本发明涉及应用最小的抗原决定簇或模拟前者的抗独特型抗体，作为癌症治疗和预防方法中的有效活性成分。这种抗原决定簇或抗独特型抗体还能够用作亲和纯化以及鉴定单克隆抗体的试剂，进而用作癌症诊断和治疗的试剂。

另一方面，本发明涉及改善CA215的免疫检测，用直接与抗原结合的选择性单克隆抗体，或者用与IgG反应的抗体，作为新的夹心检测的组成部分。

另一方面，本发明涉及改进的RP215修饰形式的单克隆抗体，包括人源化形式。人源化形式的RP215可作为治疗方法，也能够与另外的抗肿瘤组分结合，提高该组分的靶向效应。

另一方面，本发明涉及利用CA215抗原的分泌型和细胞膜结合型的双重属性特点的方案。该方案中通过检测分泌形式的抗原来实现体液的诊断；或选择性使用本发明中改进的分析系统，随后应用发明中的选择性结合细胞毒素或放射性同位素的人源化抗体来治疗或定位实体肿瘤。

附图简要说明

图1至图5是来自人IgG，RP215单克隆抗体和3个CA215各自样本的N连接多糖的全部ESI-MS质谱图。

图6显示清洗对结合在OC-3-VGH细胞膜上的CA215的影响。

图7显示OC-3-VGH细胞系的分泌模式与一个对应该CA215分泌形式的杂交瘤细胞系相比较。

发明的实现