[实用新型]检测猪繁殖障碍性病毒传染病病原的试纸条无效
申请号: | 200820148807.X | 申请日: | 2008-08-28 |
公开(公告)号: | CN201285399Y | 公开(公告)日: | 2009-08-05 |
发明(设计)人: | 张改平;肖治军;李学伍;邓瑞广;杨艳艳;杨继飞;赵东;王爱萍;邢广旭;柴书军;刘庆堂 | 申请(专利权)人: | 河南省农业科学院 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/577;G01N33/545;G01N33/544 |
代理公司: | 郑州大通专利商标代理有限公司 | 代理人: | 陈大通 |
地址: | 450002河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 繁殖 障碍 性病 传染病 病原 试纸 | ||
技术领域
本实用新型涉及一种检测猪病毒性传染病病原的器具,特别是涉及一种检测猪繁殖障碍性病毒传染病病原的试纸条。
技术背景
我国是生猪的生产和消费大国。随着大中小型规模化养猪场、种猪场数量的逐年增加,猪繁殖障碍性疾病已成为我国规模化猪场最重要的疾病之一,发病率平均达30%以上,造成巨大的经济损失,并严重制约着养猪业的发展。猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪乙型脑炎病毒(JEV)是造成猪繁殖障碍的三种重要病毒。PRRSV引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),主要表现为感染母猪发热,厌食,怀孕后期发生流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等,感染仔猪发生呼吸困难(肺炎)、免疫机能障碍和高死亡率,因部分病猪的耳朵发紫,又称蓝耳病。蓝耳病近年来在我国广为传播,如2006年我国南北10多个省(市、区)的猪群发生的“高热病”现认为是高致病性PRRSV毒株引起,发病猪群达200万头,死亡40万头。因此,PRRSV被认为是导致近年来猪肉价格上涨的主要疾病之一。PPV引起猪细小病毒病,主要表现为受感染的母猪,特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、死胎、畸形胎、木乃伊胎和弱仔以及屡配不孕,而其他年龄的猪感染后不表现明显的临床症状。目前猪细小病毒病在我国猪群中广为传播,在大多数感染猪场呈地方性流行并且很难净化,从而造成了持续的经济损失,严重阻碍了养猪业的健康发展。JEV引起人畜共患病—流行性乙型脑炎。猪乙型脑炎,主要表现为感染猪发热,厌食,母猪怀孕后期突然发生流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等,新生仔猪良莠不齐、死亡率高,感染公猪出现睾丸炎。猪乙型脑炎主要由带病毒的蚊虫叮咬而传播,主要分布在亚洲各国,我国大部分地区均有本病发生。
快速诊断是有效防控疾病的基础。但在生产中,PRRSV、PPV和JEV引起的繁殖障碍性疾病,临床症状相似,而且经常混合感染,单凭临床病理变化往往不能及时正确诊断,最后确诊有赖实验室检查,如检测病猪样品中病原或其特异抗体的存在、甚至用分离到的病原复制出临床病例。目前实验室检测这三种病毒的方法有:(1)病毒分离与鉴定,无菌取病猪样品接种肺泡巨噬细胞或MarC-145细胞(对PRRSV)、猪传代肾细胞(对PPV和JEV)培养相应病毒,用酶或荧光素印迹抗体检测细胞培养中的病毒,或用中和抗体鉴定病毒;(2)用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PRRSV感染猪血清中的特异抗体,用血凝抑制试验(HI)检测PPV或JEV感染猪血清中的特异抗体;(3)用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞培养物或病猪样品中的PRRSV或JEV核酸,用PCR检测细胞培养物或病猪样品中的PPV核酸。
病毒分离与鉴定和PCR检测技术操作复杂、需要仪器和较长的时间,不适合生产或现场的快速诊断需要。ELISA和HI比病毒分离与鉴定和PCR技术简便、快速,常用来检测PRRSV(ELISA)、JEV和PPV(HI)及其抗体,但仍不便于我国基层或现场普遍推广应用。因为ELISA仍需要酶标仪和试剂,较复杂的操作步骤和经验,HI也需要新鲜的豚鼠或鹅红血球;这些仪器、试剂在基层或者缺乏,或者缺乏操作人员和保存条件。为此,有人研究报道了用斑点免疫金渗滤法来检测PPV、JEV和PRRSV。这种方法利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用,将抗原—抗体反应由ELISA或HI的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行,并采用胶体金印迹代替酶印迹和红血球印迹,凭肉眼直接观察胶体金的显色状况而判断结果,因此比ELISA和HI更简便、快速和实用。但目前报道的斑点免疫金渗滤法一次只检测一种猪病病原,即使这样,也至少需添加2次试剂和洗涤2次才能获得结果;如果要鉴别诊断上述三种猪病病毒,则同时需要多种试剂盒和十几个操作步骤,非专业的基层人员使用仍显得不方便。
专利文献CN 101216488A中公开了一种检测猪繁殖与呼吸综合症抗体的试纸条及其制备方法,其是通过检测PRRSV抗体进行诊断,而不是直接检测病毒的存在,并且只能间接地诊断三种主要的猪繁殖障碍性病毒中一种(PRRSV),有很大的局限性。
实用新型内容
本实用新型要解决的技术问题是提供一种结果显示直观、准确的检测猪繁殖障碍性病毒传染病病原的试纸条,该检测试纸条和斑点免疫金渗滤法一样特异、敏感但操作更简便、快速和实用,且检测成本更为低廉。
为解决上述技术问题,本实用新型采用的技术方案是:
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