[发明专利]一种硬基质生物芯片的封闭方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硬基质生物芯片的封闭方法，属于生物芯片技术领域。

背景技术

生物芯片技术的出现，使在一个实验中同时平行研究成千上万个基因及基因产物成为可能。生物芯片技术的优势在于高检测灵敏度，低样本消耗量和高通量分析。生物芯片技术作为基因表达分析，序列分析，临床诊断，药物发现和药物筛选的独特方法已经引起了全世界的兴趣。目前，硬质基片形式的生物芯片的制作，主要是将玻璃片或硅片等硬质基片经表面化学处理后，直接在基片上合成探针，或者将合成好的探针、抗体、抗原等生物样品点加到基片上，通过化学结合反应，将生物样品固定在硬质基片上，它的优点在于样品固定牢固，精密度好，但它的缺点在于经过化学处理的固体表面空白位点难以封闭，造成芯片本底值高，影响分析灵敏度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种能降低芯片本底，提高分析灵敏度的硬基质生物芯片的封闭方法。

本发明的技术方案是：

(1)称取柠檬酸三钠2～12克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L的NaOH调pH至8.0～12，称取BSA0.5～5g加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭液1；

(2)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C；

(3)量取溶液C 100毫升，称取BSA 2～15克，蔗糖1～8克加入溶液C中，搅拌均匀，配成封闭液2；

(4)将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，30～40摄氏度反应2～5分钟；

(5)将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，25～37摄氏度反应15～30分钟；

(6)将生物芯片取出吹干。

有益效果：本发明的硬基质生物芯片的封闭方法，通过使用不同pH，不同蛋白浓度的封闭液进行封闭，达到降低芯片本底，保持生物芯片活性的效果。高pH条件时，有利于硬基质表面活化机团与封闭蛋白发生化学结合，但同时会使目标蛋白失活，因此作用时间要短；中性pH，高蛋白浓度，一方面中和芯片表面的pH环境，另一方面给芯片“穿上”一层蛋白外衣，尽量隔断目标蛋白与空气结合，保护目标蛋白。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

(1)称取柠檬酸三钠2克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L的NaOH调pH至8.0，称取BSA0.5克加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭液1；

(2)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C；

(3)量取溶液C 100毫升，称取BSA2克，蔗糖1克加入溶液C中，搅拌均匀，配成封闭液2；

(4)将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，30摄氏度反应2分钟；

(5)将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，25摄氏度反应15分钟；

(6)将芯片取出吹干。

实施例2

(1)称取柠檬酸三钠5克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L的NaOH调pH至9.0，称取BSA 1克加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭液1；

(2)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C；

(3)量取溶液C 100毫升，称取BSA 5克，蔗糖2克加入溶液C中，搅拌均匀，配成封闭液2；

(4)将硬基质生物芯片浸入封闭液1中，35摄氏度反应2分钟；

(5)将硬基质生物芯片从浸入的封闭液1中取出，浸入封闭液2中，30摄氏度反应15分钟；

(6)将芯片取出吹干。

实施例3

(1)称取柠檬酸三钠8克溶于100毫升纯化水中，搅拌均匀后，用0.5mol/L的NaOH调pH至10.0，称取BSA 2克加入溶液中，搅拌均匀，配成封闭液1；

(2)称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C；

(3)量取溶液C 100毫升，称取BSA 8克，蔗糖4克加入溶液C中，搅拌均匀，配成封闭液2；