[发明专利]大豆球蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种大豆球蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

大豆作为人和动物优质的植物蛋白和油脂来源，具有广泛应用。大豆及豆制品大量应用于食品行业，玉米-豆粕型日粮作为主要的动物饲料广泛应用于畜禽生产。但是大豆球蛋白作为含量丰富、热稳定性强、具有较强免疫原性的大豆抗原蛋白，经常引起过敏反应，在医学领域常表现为婴幼儿腹泻，以及5-6％的儿童和2-4％的成年人对大豆和豆制品表现出临床症状，常表现为腹泻，严重的伴有颤抖、咽喉水肿和急性哮喘等症状；在畜牧行业，大豆抗原蛋白可导致断乳仔猪和妊娠母猪、犊牛、大鼠等幼龄动物的过敏反应，常表现为腹泻、生长性能下降直至死亡。

目前已经开发了多种加工工艺来处理大豆、豆粕及豆制品，如多项研究证实豆粕、膨化大豆、发酵豆粕、大豆浓缩蛋白和大豆分离蛋白等大豆制品的抗原活性弱于生大豆。然而大豆球蛋白是热稳定性的抗原蛋白，直接加热并不能彻底破坏其抗原活性。例如，经过加热处理的大豆制品中具有抗原活性的球蛋白残留量仍高达18％，这个量足以引起婴儿的过敏反应。

所以，对不同加工工艺处理前后大豆、豆制品、豆粕饲料中大豆球蛋白含量的检测具有重要的理论意义和应用价值。已有的定量检测方法主要以抗血清测定和高效液相色谱分析为主。这些方法从免疫学角度来看仍存在一定的缺陷，前者多抗血清需要重复制备、不同实验室之间不能参比、灵敏度和准确性低；后者则无法体现免疫反应性，并且由于前处理过程繁琐和需要昂贵的专门仪器而难以广泛应用于大豆制品的现场检测。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种可用于检测大豆球蛋白的单克隆抗体与分泌该抗体的杂交瘤细胞。

本发明所提供的分泌大豆球蛋白的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.2791的抗大豆球蛋白单克隆抗体细胞株4B2产生。该单克隆抗体为包含κ轻链的鼠IgG₂抗体，其亲和常数(Ka)为3.3×10⁸L/mol。

抗大豆球蛋白单克隆抗体细胞株4B2 CGMCC No.2791已于2008年12月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区大屯路)，保藏登记号为CGMCC No.2791。

本发明的另一个目的是提供含有上述单克隆抗体的检测大豆球蛋白的试剂盒，所述试剂盒为酶联免疫检测试剂盒。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，本发明所提供的含有上述单克隆抗体的检测大豆球蛋白的试剂盒中，还含有其它酶联免疫检测试剂，如酶标二抗、大豆球蛋白标准品溶液、显色液、终止液、洗涤液等。

将上述大豆球蛋白的单克隆抗体和固相载体相偶联得到的免疫亲和吸附剂，以该免疫亲和吸附剂为填料的免疫亲和色谱柱和含有该免疫亲和吸附剂和免疫亲和色谱柱的试剂盒均属于本发明的保护范围。

其中，所述固相载体可为纤维素、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃、琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶等亲和层析载体。

本发明制备的大豆球蛋白单克隆抗体，为大豆球蛋白的基础研究、品种筛选和改造、临床诊断提供了有利的工具，可用于深入研究大豆球蛋白的生物学效应。具体而言可应用于：

(1)检测大豆球蛋白，如饲料行业、食品行业高通量快速检测大豆、豆粕、豆制品、豆粕饲料中大豆球蛋白的含量；

(2)将该抗体作为研究大豆抗原性的工具，进行大豆种质资源筛选、品种改造；

(3)应用该抗体制备免疫亲和柱，来分离纯化大豆球蛋白；

(4)应用该抗体进行动物实验研究；

(5)将大豆球蛋白单克隆抗体进行标记(如用FITC进行标记)，用于临床诊断或辅助诊断对大豆食物过敏的患者；

(6)应用该抗体进行免疫组化检测大豆球蛋白在器官组织、各种体液的分布；

(7)应用该抗体作为大豆球蛋白的拮抗剂，可以进行药理学研究，用于治疗大豆抗原蛋白过敏性疾病。

用本发明的大豆球蛋白单克隆抗体检测大豆球蛋白，克服了传统的SDS-PAGE、多抗血清间接性ELISA检测方法存在的不同实验室之间不能参比、灵敏度和准确性低、需要重复免疫制备多抗血清的缺点，其检测准确性接近反相高效液相法(RP-HPLC)，而且成本很低，可满足饲料行业、食品行业相关企业单位高通量快速检测大豆、豆粕、豆制品中大豆球蛋白含量的需要，在大豆制品抗原物质定量检测和致过敏性的评估中具有广阔的应用前景。

附图说明