[发明专利]亚全能干细胞、其制备方法及其用途

权利要求书

1.一种从剪断的人类脐带或胎盘制备亚全能干细胞的方法，该方法包括下列步骤： 

a.无菌采集剪断的人类脐带和/或胎盘； 

b.进行组织破碎，蛋白酶降解组织，过筛，分离得到原代单个核细胞； 

c.将原代单个核细胞接种于装有干细胞培养液I或II的培养容器中贴壁生长，蛋白酶消化后培养扩增传代四代以上，收集干细胞，分装后液氮低温冻存，建亚全能干细胞种子库， 

其中，干细胞培养液I的制备过程如下：50-70%体积的DMEM/F12培养液和30-50%体积的MCDB-201培养液混合成基础培养液后，再添加下列终浓度的组分：2-10%体积的血清，10^-8mol/L的地塞米松，10-50mg/mL的ITS，0.1-10mmol/L的谷氨酰胺，1-100ng/mL的人表皮细胞生长因子和1-100ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子；干细胞培养液II的制备过程如下：50-70%体积的DMEM/F12培养液和30-50%体积的MCDB-201培养液混合，再添加下列终浓度的组分：0.1-5%W/V的人血清白蛋白，1-100μg/mL的亚麻酸，1-100μg/mL的亚油酸，0.1-5%体积的非必需氨基酸，10^-8mol/L的地塞米松，10-50mg/mL的ITS，0.1-10mmol/L的谷氨酰胺，1-100ng/mL的人表皮细胞生长因子和1-100ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子; 

其中所述的亚全能干细胞，其来源于剪断的人类脐带或胎盘，表达标志分子CD151和Sox-2，不表达CD34。 

2.根据权利要求1所述的制备亚全能干细胞的方法，其中所述的蛋白酶是胶原酶I或胰蛋白酶。 

3.如权利要求1或2所述方法制成的亚全能干细胞，其特征在于：其还表达标志分子OCT4、巢蛋白、CD90、CD29、CD13、CD166、CD105、CD44、CD73、CD49e、神经节苷脂GD2和HLA-I；其不表达CD184、CD31、CD45、CD133、CD106、CD11b、CD271、CD41、CD61、CD42b和HLA-II。 

4.根据权利要求3所述的亚全能干细胞，其特征在于：其在培养容器中贴壁生长，能向人体内、中、外胚层组织分化，注射至动物体内不产生畸胎瘤。 

5.根据权利要求4所述的亚全能干细胞，其特征在于：所述胚层组织是血管、神经、肝脏、心肌、骨、软骨和脂肪组织。

6.权利要求3至5中任一权利要求所述的亚全能干细胞在制备用于基因治疗的药物中作为载体细胞的用途。

7.权利要求3至5中任一权利要求所述的亚全能干细胞在制备用于治疗细胞损伤或细胞衰老疾病的药物中的用途。

8.权利要求3至5中任一权利要求所述的亚全能干细胞在制备促进干细胞向成脂细胞、成骨细胞、成软骨、心肌细胞、神经细胞、肝细胞转化及刺激造血的药物中的用途。

9.权利要求3至5中任一权利要求所述的亚全能干细胞在制备用于治疗大脑损伤疾病的药物中的用途。

10.权利要求3至5中任一权利要求所述的亚全能干细胞在制备用于治疗免疫调节异常疾病的药物中的用途。

11.权利要求3至5中任一权利要求所述的亚全能干细胞在制备用于治疗移植物抗宿主病的药物中的用途。