[发明专利]一种胆甾醇衍生物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种胆甾醇衍生物，特别是涉及一种具有杀虫作用的19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

自20世纪60年代以来，已经从柳珊瑚中分离获得了许多结构新颖的活性化合物，主要包括二萜类、甾体类、生物碱类等，其生物活性包括抗肿瘤、抗菌、抗病毒、酶抑制作用等。对柳珊瑚的化学成分研究已经成为海洋天然产物研究的一个热门领域。

到目前为止，国内外未见对蕾二歧灯芯柳珊瑚Dichotella gemmacea(valenciennes)的化学成分的相关报道。更未见从蕾二歧灯芯柳珊瑚中分离得到19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物，也未见从其它生物中分离得到这种衍生物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于蕾二歧灯芯柳珊瑚的19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物及其制备方法与作为杀虫剂在生物农药中的应用，它能满足现有技术的上述需求。

一种19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物，其特征在于它的结构式为

式中R₁为烃基，R₂为酰基。

上述19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物的制备方法，其特征在于先将蕾二歧灯芯柳珊瑚用醇提取，将所得提取液减压浓缩得到浸膏，将该浸膏悬浮于水中，用有机溶剂萃取；将所得萃取液减压浓缩后运用硅胶柱层析色谱、凝胶色谱和制备高效液相色谱分离纯化，得到19位甲基氧化为羧基的胆甾醇类化合物。

上述的19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物在制备生物农药杀虫剂中的应用。

本发明从我国南海蕾二歧灯芯柳珊瑚中获得19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物，该衍生物具有杀虫活性，可用于开发生物农药杀虫剂，应用前景广阔。

具体实施方式

制备本发明的化合物时，采取下述各步骤：

(1)生物样品的提取：取新鲜的生物样品蕾二歧灯芯柳珊瑚2850g，用自来水清洗，除去泥沙，将该样品粉碎后先用3L 95％(质量百分数，下同)乙醇浸提3次，每次1d。合并3次提取液，旋转蒸发至干，用2L甲醇脱盐3次，减压浓缩得总浸膏。总浸膏用500mL水稀释后，用等体积石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取6次，减压浓缩萃取液得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇浸膏，各浸膏密封保存于4℃冰箱中备用。

所述的乙醇可改为甲醇、异丙醇或正丁醇。

(2)分离：提取物各相萃取浸膏，首先经过减压硅胶柱层析(VLC)将各相浸膏按照其极性大小分成极性相近的几个部分，然后经过硅胶柱层析色谱、凝胶色谱和制备高效液相色谱分离和纯化，得到本发明的化合物。所得化合物的波谱数据列于表1。

表1化合物1的核磁共振波谱数据

本实施例制得的19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物的结构式为：

式中R₁为甲基，R₂为乙酰基。

本发明的化合物对卤虫致死活性实验：

取卤虫卵15mg置于500mL三角瓶中，加入处理过的海水300mL，用充气泵缓缓充气，25℃水浴中孵化48h，除去卵壳及未孵化的卵，获得卤虫幼体，备用。

卤虫致死活性实验依照Solis的改良法，取24孔培养板，每孔加1mL含卤虫幼体的溶液(每孔20个卤虫)，制成测试培养板。将粗提物、各有机相浸膏及各单体化合物，用DMS0/水配置成2mg/mL的溶液，加入培养板孔中，每个粗提物及各相浸膏样品设置100μg/mL，50μg/mL，10μg/mL三个终浓度，各化合物设置50μg/mL，25μg/mL，10μg/mL三个终浓度。每个浓度的样品又各设三个平行样。培养24h后，记录卤虫死亡个数。卤虫致死活性采用校正死亡率表示：校正死亡率％＝[(对照组存活率-样品组存活率)/对照组存活率]×100％

本发明的19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物在50μg/mL对卤虫的致死率为94.4％，在浓度为25μg/mL下的致死率为57.9％，表现出强烈的卤虫致死活性。

实验表明，本发明的19位甲基氧化为羧基的胆甾醇衍生物对卤虫表现出强的致死活性，因此可将其作为生物农药杀虫剂。