[发明专利]大白菜核质互作雄性不育的SRAP标记及其用于辅助选择育种的应用

说明书

技术领域

本发明属于农业的蔬菜品种选育与生物技术领域，涉及白菜的品种选育 和分子标记辅助选择育种方法，特别是一种大白菜核质互作雄性不育的 SRAP标记及其用于辅助选择育种的应用。

背景技术

近三十多年以来，植物雄性不育一直是作物遗传育种、生物学研究的热 门领域。细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility，CMS)是其中最 有利用价值的雄性不育类型。而以叶球为产品的大白菜，虽然不需要恢复系， 利用方便，但用携带恢复基因的材料选育不育系程序麻烦、周期长，采用分 子标记技术可以在苗期判断是否带有可育基因和不育基因、加快选育步伐。

西北农林科技大学园艺学院蔬菜科学系自20世纪70年代开展大白菜雄 性不育研究，先后育成了CMS3411-7和CMS7311等不同来源、不同性状的大 白菜异源胞质雄性不育系，并应用于杂交一代大白菜制种。由于传统的育性 表型选择要等到开花，通过田间直接观察完成。对于携带恢复基因的优良材 料，要将其转育为不育系，必须经过杂交，自交，同时用不育系测交判断其 基因型等过程，操作起来费时费力，周期长，育种进程慢。为了加快大白菜 胞质雄性不育育种速度，采用现代生物技术，进行分子标记辅助育种十分迫 切。

分子标记是近年来研究的热门领域，它以DNA为研究对象，具有以下显 著的优越性：

(1)直接以DNA的形式表现，在植物体的各个组织、各发育时期均可 检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否的问题；

(2)数量极多，遍及整个基因组，可检测到的基因座位几乎是无限的；

(3)多态性高，自然界存在着许多等位变异，不需专门创造特殊的遗 传材料；

(4)表现为“中性”，不影响目标性状的表达，与不良性状无必然的连 锁；

(5)有许多分子标记表现为共显性(codominance)，能够鉴别出纯合 基因型与杂合基因型，提供完整的遗传信息，因而现已形成许多分子标记系 统。

SRAP(Sequence-related amplified polymorphism，SRAP)是由美国 加州大学蔬菜作物系Li与Quiros博士于2001年提出，又叫基于序列扩增 多态性(sequence based amplified polymorphism，SBAP)，作为一种新的 分子标记技术，SRAP具有简便、稳定、中等产率的特点，在基因组中分布 均匀，高频率的共显性则明显优于AFLP标记。SRAP是基于PCR的分子标记 技术，具有与RAPD同样的操作简便性，仅在扩增产物的检测上采用较复杂 的聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染技术，但是与琼脂糖凝胶检测相比，分辨率 大大提高，而且不使用溴化乙锭，不会造成环境污染，减少操作危险性。多 次重复试验结果稳定，克服了RAPD重复性稳定性差的缺点。与AFLP相比， 它无须繁琐的操作，成本较低。SRAP的上游引物和下游引物可以通用，两 两搭配组合，省却了引物开发的困难，减少了合成引物的费用，同时也大大 提高了引物的使用率。

总之，分子标记不受基因表达时间、显隐关系、环境因素等条件影响， 利用与目标性状紧密连锁的分子标记可在生育早期阶段进行选择，减少了选 择的盲目性，缩短了育种年限，从而可以大大提高育种效率，加快育种进程。

发明内容

本发明的目的在于。提供一种大白菜核质互作雄性不育的SRAP标记及 其采用该SRAP标记用于辅助选择育种的应用。本发明采用SRAP技术，寻找 与育性基因紧密连锁的SRAP分子标记，为开展大白菜核质互作雄性不育分 子标记辅助育种奠定基础。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种大白菜核质互作雄性不育的SRAP标记，其特征在于，该SRAP标记 是特异片断Rf24-5-3和特异片断ms16-23-3，特异片断Rf24-5-3的全长为 366bp，特异片断ms16-23-3的全长为372bp，其核酸序列分别为：

特异片断Rf24-5-3：