[发明专利]一种花叶夹竹桃的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物的组织培养法，具体地说，是花叶夹竹桃的组织培养法。

背景技术

花叶夹竹桃(Nerium indicum cv.Variegata)是夹竹桃科夹竹桃属常绿直立大灌木。原产于伊朗、印度、尼泊尔，我国长江以南各省区广为栽植的常用彩叶树种。整个植株，黄绿相间，有的叶片全黄，有的叶片黄、绿交错。植株高达4-5米，萌蘖性强，极耐修剪。叶革质，较原种叶片略薄，花冠粉红色，径约5厘米，有特殊香气，单瓣或重瓣，果长圆形，花期6-10月，常植于公园、庭院、街头、绿地等供观赏。为了保持植株原有性状，必需采用无性繁殖方法繁殖，传统的繁殖方法是扦插、压条，但繁殖速度慢。由于种质资源少，传统方法很难在短期内获得大量植株。在现有技术中，没有有关花叶夹竹桃组织培养方法的报道。

发明内容

一种花叶夹竹桃的组织培养方法，它基本上由下列步骤组成：

步骤1：采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒，(一般8-10分钟)，用无菌水冲洗3-5次；

步骤2：在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗，所述的启动培养基为：每升基本培养基加：噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-苄基嘌呤(BA)1.0-1.5毫克和吲哚丁酸(IBA)0.02-0.1毫克；

步骤3：将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步，所述的增殖培养基为：每升基本培养基加：玉米素(ZT)0.5-1.5毫克、6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克、吲哚丁酸0.05-0.2毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；

步骤4：将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步，所述的壮苗培养基为：每升基本培养基加：玉米素(ZT)0.2-1.0毫克、6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、吲哚丁酸0.1-0.3毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；

步骤5：将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，所述的生根处理产生根原基培养基为：每升基本培养基加：α-萘乙酸(NAA)0.2-0.5毫克、吲哚丁酸0.4-0.8毫克和活性炭(Charcoal)2000-3000毫克；

步骤6：将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭:黄心土＝1:1(体积比)的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度85％以上，遮光(前10天)75％，后逐渐见光，25天后生根成活，生根率达86％以上，40-50天，全光照。

上述的花叶夹竹桃的组织培养方法，所述的基本培养基的配方见表1：

表1：每升基本培养基中含有如下物质种类和质量：