[发明专利]一种防治烟草黑胫病的地衣芽孢杆菌菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种防治烟草黑胫病的菌剂，以及该菌剂的制备方法。

背景技术

烟草是我国重要的经济作物，同时也是病害危害最严重的作物之一，从播种到收获，整个过程都可受到病原物的侵染。烟草黑胫病(tobacco blackshank)是世界烟草生产中危害最严重的病害之一，特别是在温带、亚热带和热带发生较重，是我国烟草的主要病害。在我国，除个别较寒冷的地区，各主要产烟省均有不同程度的发生。其中安徽、河南、山东为历史上的重病区；云南、贵州、福建、广东、湖南、四川等烟区发生也相当普遍，且多与烟草青枯病混合发生，因此为害更为严重。近年来，新烟区也都有发生。据不完全统计，我国烟草黑胫病平均每年发病面积高达76,373公顷，产量损失2,869.26万公斤，产值损失超过1.23亿元人民币。

烟草黑胫病是一种典型的土传病害，目前国内在防治时主要以栽培抗病品种、轮作等农业措施和大剂量的化学农药进行防治。但是，可供区域栽培的抗性品种很有限，难以满足实际生产的需要。采用轮作在我国人多地少的情况下可行性越来越低。化学防治不仅成本高、防效差，而且污染环境，影响品质，并且一些病原真菌对生产上常用的甲霜灵表现出抗药性，使防治效果变差，防治难度加大。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种有效、无毒、安全、无残留、使用简便的防治烟草黑胫病的菌剂。同时，本发明还提供该菌剂的制备方法及其在防治烟草黑胫病中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

A.本发明提供了一种防治烟草黑胫病的菌剂，该菌剂的生产菌株分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)GP13，保藏号为CGMCCNo.1699；其菌株的试管斜面培养基配方为：牛肉浸膏3g，大豆蛋白胨5g，葡萄糖5g，琼脂17-20g，蒸馏水1000ml，pH6.8-7.2；其液体发酵培养基配方为：大豆蛋白胨10g、蔗糖5g、、酵母膏2g、磷酸二氢钾1g、硫酸亚铁0.02g、硫酸锌0.02g、硫酸锰0.02g、硫酸镁0.3g、自来水1000ml、花生油0.1％、消泡剂0.01％、pH7.0-7.2。

本发明的生产菌株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)GP13，分离自云南华宁烟草根际土壤，经形态学、培养性状、常规生理生化测定，该生防细菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的一个新菌株GP13。该菌株具有以下特征：①菌落不规则圆形，菌落边缘裂页状，菌落初期光滑，后期起皱，灰白色，蜡质，不透明，菌体在液体中不易分散，不产色素，产芽孢，芽孢不膨大，亚端生；在显微镜下观察：菌体直杆状，大小0.7～0.9×2.0～2.8μm。②该菌株定殖能力强、抑菌能力强、能促进烟草幼苗生长，具有杀菌、防病、促进生长的作用。该菌株可在烟草的根际和根内定殖。对该作物上的黑胫病病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)有显著抑制作用，抑菌圈直径平均为12.0-25.0mm。③具有以下生理生化特征：可厌氧生长，能在50℃、pH5.7、7％NaCl下生长；接触酶阳性，甲基红试验阳性，VP试验阳性；水解淀粉，液化明胶，分解酪素，硝酸盐还原为亚硝酸盐；利用葡萄糖、木糖、L-阿拉伯糖均能产酸，不能利用甘露醇产酸；利用柠檬酸盐、丙酸盐、甘油。

本发明生防菌株地衣芽孢杆菌(Bacillusl licheniformis)GP13的培养方法：

1.试管种培养

试管斜面培养基配方为：牛肉浸膏3g，大豆蛋白胨5g，葡萄糖5g，琼脂17-20g，蒸馏水1000ml，pH6.8-7.2。

将Bacillusl licheniformis GP13移到试管斜面培养基上，在30℃±1℃恒温培养1～2天，获得试管种。

2.摇瓶液体发酵培养

液体发酵培养基配方为：大豆蛋白胨10g、蔗糖5g、酵母膏2g、磷酸二氢钾1g、硫酸亚铁0.02g、硫酸锌0.02g、硫酸锰0.02g、硫酸镁0.3g、自来水1000ml、花生油0.1％、消泡剂0.01％、pH7.0-7.2。

将每支试管斜面加无菌水5-10ml，用接种环刮下菌苔，并摇匀形成细菌悬液，以0.5％的体积比接入装培养液量为30％～50％(装培养液的容积与容器的容积比)的三角瓶中，于30℃±1℃恒温、150～200转/分钟转速振荡培养12小时，可转接至发酵罐中进行发酵生产。

3.发酵罐液体发酵条件