[发明专利]131I标记的抗肺癌人源化单克隆抗体1E2及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种放射性抗肿瘤抗体，特别涉及一种用¹³¹I标记的抗肺癌人源化单克隆抗体1E2及其应用。

背景技术

随着医学技术的不断发展，放射免疫治疗(RIT)是除手术、放化疗外的又一肿瘤治疗手段。RIT是将放射性核素标记抗肿瘤抗体注射入体内，单克隆抗体及标记核素特异性地与肿瘤细胞结合(定向制导)，将放射性核素携带到肿瘤部位，放射性核素衰变过程中发出的射线对肿瘤细胞DNA造成损伤，最终造成肿瘤细胞生长抑制和坏死。放射免疫治疗是继肿瘤化疗和放射治疗后又一全新的治疗方法，它结合了单克隆抗体的靶向作用与放射性核素内照射的强杀伤作用，具有疗效好、副作用低的特点。国内外已有学者利用核素对胶质瘤、淋巴瘤、乳腺癌、肝癌、腹膜癌、肺癌、骨与软组织肿瘤以及前列腺癌骨转移等进行诊断及治疗。目前市场上所用单克隆抗体多为鼠源性的抗体，这些抗体因为人抗鼠免疫反应而不适合于临床运用。针对肺癌的放射免疫治疗(RIT)有人用钇-90标记抗肺癌单克隆抗体LC-1采用局部治疗的给药方式，抑瘤率较低；唯一上市的新药¹³¹I-chTNT其作用机制是：晚期实体肿瘤的典型特征是存在大量的变性坏死细胞，在细胞出现变性坏死的过程中，细胞膜会出现许多裂隙，胞浆内大量成分流失到胞外，细胞内的染色体的三维结构遭到破坏，产生大量变性DNA单链复合体，这种单链复合体就是¹³¹I-chTNT作用于实体肿瘤的靶点，故该药物仅适用于放、化疗失败的晚期肺癌患者。

发明内容

本发明提供了一种肿瘤靶向性好的、抑瘤率较高的、适用于各期非小细胞肺癌的¹³¹I标记的抗肺癌人源化单克隆抗体1E2。

采用的技术方案如下：以浓度是200μg/ml的人源化1E2抗体、放射性比活度大于2.5GBq/ml的Na¹³¹I、浓度是1μg/μl的氯氨T为原料，三者体积比是1∶2∶1进行取样，使用常规氯胺T法制得；人源化1E2抗体为本发明人制备保存，使用前用pH7.5、浓度为0.5mol/L的磷酸盐缓冲液稀释至浓度为200μg/ml；其余所有的原材料制剂均可购买得到。

人源化1E2抗体的制备方法如下：手术中切取病理证实为非小细胞肺癌患者的癌旁淋巴结，抽提淋巴结组织内的总RNA，利用噬菌体抗体库构建技术得到含1E2抗体的噬菌体抗体库，利用氨甲酰磷酸合成酶抗原吸附噬菌体抗体1E2，经洗涤、筛选、扩增得到对CPS1特异的人源化抗体1E2，最后进行鉴定和抗体活力分析。

单克隆抗体的选择在放射免疫治疗中是非常重要一方面。本发明经过大量的筛选用人源化1E2作为标记抗体。1E2是抑制肺癌细胞生长的单克隆抗体，其与肿瘤细胞膜结合，抑制癌细胞增殖，以单克隆抗体与放射性核素联合进行导向治疗，在制备方法上使用常规氯胺T法标记¹³¹I-1E2简单有效，标记率为77.73％，放化纯度为95.63％，放射性比活度为432MBq/μg。在治疗效果上其优点是将放射性核素的优点和人源化单克隆抗体集于一体，一方面，核素的放射性杀伤作用范围可达数十个细胞直径，在一定程度上克服了肿瘤抗原的表达异质性所造成的盲区，而且核素对瘤细胞能直接杀伤，不需免疫毒素或免疫药物的内在化过程。核素的杀伤作用不依赖于DNA的合成(对静止期肿瘤细胞也有杀伤作用)。另一方面，有抗体导向的治疗优点，提高了药物对肿瘤细胞的靶向性，从而提高疗效，从其作用机制来看，适用于各期非小细胞肺癌的治疗。由于使用了人源化单克隆抗体，具有高效、低毒、病人不易产生抗药性等优点，大大减少了人抗鼠免疫反应，从而减少副作用，更适合临床应用。同时又克服了鼠单抗半衰期短、反复应用会引进病人的HAMA等缺点，人源性单抗已成为继手术切除、放疗及化疗后又一治疗肿瘤的药物。

为了证明¹³¹I标记的抗肺癌人源化单克隆抗体1E2对非小细胞肺癌的治疗效果，做了下述试验：