[发明专利]重组胸腺素α1二串体蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及目的蛋白质的重组质粒的构建、原 核表达、纯化及鉴定，特别涉及胸腺素α1(Tα1)二串体蛋白及其制备方法。

背景技术

1、胸腺素α1的生物化学特性

1.1胸腺素家族

胸腺素主要是由胸腺产生，最初由Goldstein自胎牛胸腺蛋白提取液中制 备得到，含40多种多肽成分，根据这些多肽在等电聚焦电泳分析图谱上的位 置，划分为α、β、γ三个区：α区pI＜5，β区pI在5～7之间，γ区pI＞7。α 族胸腺素包括胸腺素α、前胸腺素α和旁胸腺素α。胸腺素α1(Tα1)是前胸腺素 α的N末端的28个氨基酸片段，其产生是由于溶酶体门冬酰内肽酶选择性裂解 位于前胸腺素原α序列中的Asn28-Gly29。

1.2胸腺素α1的化学结构

胸腺素α1是氨基端乙酰化的28个氨基酸组成的多肽激素，分子量为 3108，等电点PH为4.2。胸腺素α1结构高度保守，氨基酸序列为： NH₂-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Le u-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-COOH。

化学构象研究表明，胸腺素α1是一种线性多肽，在疏水性环境中显示具 有2个特征性的区域：其第5～8残基间是β转角，第17～24残基间是α螺旋。

2胸腺素α1的生理功能研究进展

2.1胸腺素α1与免疫学功能

胸腺素α1在体内外可以诱导T细胞的分化和成熟，并能拮抗环磷酰胺或 CD3单抗诱导的T细胞凋亡，增强T细胞介导同种或自身淋巴细胞反应能力，增 强机体免疫应答功能。并且增多IFN-γ、IL-2及IL-2R的产生。胸腺素α1还 能影响NK前体细胞的募集，增强其杀伤活性，并且可以活化巨噬细胞和树突 状细胞，纠正免疫抑制及免疫缺陷，从而提高机体的免疫力。并且具有双向 性免疫调节效应，在感染病例中，可以减轻细胞因子所致炎性损害，改善感 染导致的高代谢状态。

2.2胸腺素α1与癌症

研究发现胸腺素α1可以诱导肿瘤细胞在胞膜上合成MHC I类分子，增加 APC的数量，一定程度的恢复被抑制的细胞免疫。并通过上调癌细胞p53、Bax 表达，抑制抗凋亡基因Bcl-2表达诱导多种癌细胞株凋亡，抑制部分癌细胞 株DNA合成期。实验室及临床治疗中胸腺素α1与手术、放化疗药物或其他细 胞因子联合应用，可以明显加强疗效，减少不良反应，抑制肿瘤细胞的生长 并延长生存期。

2.3胸腺素α1与造血功能

胸腺素α1在正常鼠及荷瘤鼠中均能刺激骨髓造血，刺激小鼠骨髓集落形 成，通过上调各种克隆刺激因子如MSCF、GMCSF、GCSF和IL-3，明显增加总克 隆数和单克隆型，恢复造血机能。

2.4胸腺素α1与神经内分泌系统

实验发现，胸腺素α1能在下丘脑及垂体水平影响促肾上腺皮质激素、促 乳素、促甲状腺素和促黄体生长激素的分泌，此影响的程度随Tα1在特异作 用区的浓度而异。胸腺素α1参与海马神经元兴奋性突触传递，并能影响中枢 神经系统中神经分泌细胞的功能。此外，胸腺素α1还证明能够阻止化疗患者 神经毒性的发生。

2.5胸腺素α1与抗氧化

胸腺素α1可以减弱果糖诱导的脂肪变性大鼠模型的脂质过氧化反应，并 改善其自由基防御系统的缺陷。使老年人减少的外周血淋巴细胞数，E花环 百分率、T细胞增加，提高萎缩后的胸腺水平，起到免疫刺激和调节作用。

3胸腺素α1的应用前景

3.1治疗肿瘤

作为生物反应调节剂，胸腺素α1能够以恢复T细胞的功能并促进成熟T细 胞的增殖和细胞因子及其受体的产生，从而增强机体对肿瘤的免疫应答能力； 修饰肿瘤细胞，以诱导强烈的宿主免疫反应；可减轻化疗放疗的副作用。除 此之外，近期研究显示，高剂量胸腺素α1本身还可以抑制肿瘤生长和诱导瘤细 胞凋亡，延长生存期。并且大量文献报道，胸腺素α1大剂量使用时无发热及过 敏反应，无血液系统及肾脏毒性，不良反应及其轻微。因此，给高剂量应用 和肿瘤晚期病人、高恶性程度肿瘤患者的临床应用提供了可能。

3.2防治病毒感染