[发明专利]茶薪菇胞外木质纤维素酶诱导方法及胞外纤维素酶发酵料

说明书

技术领域

本发明涉及一种茶薪菇胞外木质纤维素酶的诱导方法。

背景技术

目前，纤维素酶广泛应用于食品工业、医疗卫生、日用化工、石油开采及饲料工业等各个领域，因此纤维素酶具有十分广阔的应用前景，专家预测纤维素酶的研究开发是新世纪可再生性资源利用的关键，但迄今为止，仍未很好的解决高效生产纤维素酶的难题，而我国对于纤维素酶又有着很高的市场需求，因而筛选高酶活菌种，是当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种以茶薪菇为原料进行胞外木质纤维素酶诱导方法。

本发明的另一目的是提供一种以茶薪菇为原料得到的胞外纤维素酶发酵料。

本发明茶薪菇胞外木质纤维素酶诱导方法包括下列步骤：

A、茶薪菇一级种的准备；

B、茶薪菇级种的制备，二级种培养基配方：麦粒98％，碳酸钙2％；

按配方将培养基拌匀后装入500毫升食用菌聚氯丙烯塑料袋中，松紧适宜，用两次纱布和一层棉花封口，121℃灭菌1.5～2小时，接入茶薪菇一级种，23～27℃恒温培养20天得茶薪菇二级种；

C、茶薪菇三级种基础培养料的制备，基础培养料拌水即得，基础培养料包括下列质量份配比的组份，棉籽壳30.0份～45.0份、木屑20.0份～40.0份、麦麸10.0份～26.0份、玉米粉5.0份～10.0份和石膏粉1.0份～2.0份；基础培养料还包括质量份配比为大于0，小于等于5.0份的豆饼；基础培养料还包括质量份配比为大于0，小于等于2.0份的茶叶；基础培养料还包括质量份配比为大于0，小于等于1.0份的红糖；基础培养料还包括质量份配比为大于0，小于等于0.5份的磷酸氢二钾；基础培养料还包括质量份配比为大于0，小于等于0.5份的复合肥，复合肥选自磷酸二铵，购买于甘肃金昌化工(集团)有限公司。拌水量的质量百分含量为上述组分总质量的120％～150％；

D、茶薪菇三级种复合加富培养料的制备，

在C步骤制得的三级种基础培养料中同时加入浓度为5克/升的复合碳源和5克/升的复合氮源，即得复合加富培养料，复合碳源为碳素：羧甲基纤维素，复合碳源加入量为三级种基础培养料总质量的20％～30％，复合氮源加入量为三级种基础培养料总质量的5％～15％；复合碳源选自质量比为1:2的甘露醇:羧甲基纤维素或者葡萄糖:羧甲基纤维素或者纤维二糖:羧甲基纤维素，复合氮源选自质量比为1:2的酵母粉:尿素或者蛋白胨:尿素或者甘氨酸:尿素。

E、茶薪菇三级种复合加富培养料的发酵，将D步骤制得的复合加富培养料拌匀后，在聚氯乙烯塑料薄膜上建成高0.5～1.5米的圆锥形堆，用打孔器在培养料堆上均匀打20～30个直径5厘米的孔，后在培养料堆上再覆盖聚氯乙烯塑料薄膜，每隔1.5～2天翻料一次，发酵终点以pH控制在5.5～7.0，发酵时间共5～8天，即得茶薪菇胞外纤维素酶发酵料；

发酵过的复合加富培养料在装袋灭菌冷却后，从两头分别接入茶薪菇二级种，23～27℃下恒温培养得茶薪菇三级种。

本发明产品为用上述方法制备的胞外纤维素酶发酵料。

本发明从酶学角度出发，以一种新兴名贵食用菌茶薪菇为生产原料，形成以高效生产茶薪菇胞外纤维素酶为主的集成技术，达到生物能源最大转化率，以缓解目前能源紧缺的局面，维护生态平衡。

附图说明：

图1是本发明的工艺流程图。

图2是本发明茶薪菇胞外纤维素酶酶活性测定的葡萄糖标准曲线图。

具体实施方式：

下面的实施例可以使本领域的技术人员更好地理解本项技术，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：

A、茶薪菇(Agrocybe chaxingu Huang)一级种的准备：茶薪菇5号由华中农业大学菌种保藏实验中心提供。

B、茶薪菇(Agrocybe chaxingu Huang)二级种的制备：

二级种培养基：麦粒1960克，碳酸钙40克。

按配方将培养基拌匀后分别装入500毫升食用菌聚氯丙烯塑料袋中，松紧适宜，用两次纱布和一层棉花封口，121℃灭菌1.5小时。接入一级种，25℃恒温培养20天可得茶薪菇二级种。

C、茶薪菇(Agrocybe chaxingu Huang)三级种基础培养料的制备：棉籽壳38克，木屑30克，麦麸18克，玉米粉8克，豆饼3克，茶叶0.5克，石膏粉1.5克，红糖0.5克，磷酸氢二钾0.25克，复合肥0.25克，拌蒸馏水130毫升。