[发明专利]蓝舌病病毒检测试纸条

说明书

一、技术领域：

本发明涉及一种检测蓝舌病病毒的器具，特别是涉及一种可快速检测蓝舌 病病毒检测试纸条。

二、背景技术：

蓝舌病(Bluetongue disease，BT)是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV) 引起家养和(或)野生反刍动物出血疾病的一种烈性动物传染病，是世界动物 卫生组织(OIE)规定的上报疫病，对动物和动物制品国际间贸易具有非常重要 的社会经济影响作用，被各国政府有关机构均设为动物疫病监测和防控的重点， 在反刍动物的双边贸易中，各国出入境检验检疫机构规定出口国必须提供无感 染此病的健康证明。

蓝舌病最早于1876年发现于南非的绵羊，由于发病绵羊持续高热后，口 腔出现溃疡损伤，口腔粘膜及舌头发蓝，1906年定名为蓝舌病。幼年绵羊对蓝 舌病最为易感，绵羊感染后表现高热，精神萎顿，口腔粘膜充血、水肿，或表 现口腔粘膜表层坏死溃疡，咽水肿，唇及舌水肿呈紫色，蹄冠淤血、肿胀疼痛 致使跛行。平均发病率为30～40％，死亡率20～30％，有时死亡率高达90％， 发病绵羊还会被毛断裂，甚至全部脱落，严重影响羊毛和肉品质量。

BTV属呼肠孤病毒科(Reoviridae)环状病毒属(Orbivirus)。环状病毒属 14个群中，BTV群与鹿流行性出血热病毒群(Epizootic hemorrhagic disease virus，EHDV)亲缘关系最为密切，有较强的交叉反应性，非洲马瘟病毒(African horse sickness virus，AHSV)的形态学和BTV极为相似，二者也有较近的亲缘关 系。BTV血清型众多，目前国际公认至少存在24个血清型，点突变产生的漂 移和单个BTV基因片段发生重排是导致BTV遗传多样性的原因。

蓝舌病多呈地方性流行，其发生、流行与库蠓等昆虫的分布、习性和生活 史关系密切，具有明显的季节性，即以晚夏与早秋多发。上世纪中期以来，蓝 舌病广泛存在于热带、亚热带和温带地区的50多个国家和地区，成为世界性 危害的虫媒性传染病。我国于1979年5月在云南省师宗首次发现蓝舌病，并 分离出BTV，从而确定了蓝舌病的存在，随后湖北、安徽、四川、山西等省区 也发现蓝舌病临床病例，目前，全国已有29个省(市)区已检出羊BTV抗体， 许多省份的牛群中亦发现BTV抗体阳性动物。我国政府十分重视蓝舌病的防治， 已把蓝舌病纳入进出口动物的必检传染病之一。

蓝舌病监测需要利用病毒分离鉴定、血清学检测和病毒核酸检测等实验室 检测手段进行确切诊断。目前实验室检测这三种病毒的方法有：(1)病毒分离 与鉴定，病毒分离鉴定是OIE推荐的BTV诊断方法之一，其灵敏度高，但完成整 个检测过程需1～2月，具有检测周期长的局限性。(2)血清学检测主要包括 琼脂免疫扩散试验(AGID)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中和试验(VNT) 等。AGID试验操作简便、敏感性高、成本低，不需要复杂实验设备，是最早得 到广泛推广应用的BTV抗体检测方法之一，也是OIE推荐使用的方法，其缺点是 与相关环状病毒如EHDV有交叉反应。竞争ELISA(C-ELISA)是OIE推荐的BTV 血清学诊断首选方法，是最敏感和特异的BTV抗体检测技术，其缺点在于高亲 和力单克隆抗体检测试剂不易获得。(3)用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 检测细胞培养物或样品中的BTV核酸，RT-PCR和实时荧光定量PCR技术具有快 速、特异、灵敏(以及定量)等特点，在BTV核酸检测中得到广泛研究。

病毒分离与鉴定和PCR检测技术操作复杂、需要仪器和较长的时间，不适合 生产或现场的快速诊断需要。ELISA和AGID比病毒分离与鉴定和PCR技术简便、 快速，常用来检测BTV(ELISA)及其抗体，但仍不便于我国基层或现场普遍推 广应用。因为ELISA仍需要酶标仪和试剂，较复杂的操作步骤和经验，这些仪器、 试剂在基层或者缺乏，或者缺乏操作人员和保存条件。用斑点免疫金渗滤法即 免疫试纸的方法检测病毒，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原- 抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶体金印迹 代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况而判断结果，因此该法比ELISA 更简便、快速和实用。