[发明专利]兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗的制法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫 苗的方法。

背景技术

兔病毒性出血症是1984年首次在我国苏南地区爆发的一种兔的烈性 传染病。主要危害青年和成年兔，死亡率高达90％以上，而对2月龄以下 的幼年兔不致病。该病的病理变化以全身各实质器官出血为特征，尤其以 气管、肺、肝、肾最为明显。该病流行期间，在疫区兔场使用各类抗菌素， 磺胺类药物进行治疗，均未能降低发病率和死亡率。目前在疫区采集、分 离、鉴定、选育得到了一株免疫原性良好的兔病毒性出血症病毒CD_85-2株， 用于灭活疫苗的生产，在四川地区使用有很好的预防效果。

兔巴氏杆菌病是由兔多杀性巴氏杆菌引起的兔的出血性败血症。引起 家兔出血性败血症死亡的多杀性巴氏杆菌的血清型是A型，目前全国各厂 家生产预防该病的疫苗较多，使用菌株差异很大。由中国兽医药品监察所 鉴定、保管、供应的兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C_51-17作生产用菌种， 实践证明该菌种的免疫原性良好。然而根据现有疫苗的制备方式，将病毒 毒株或者菌株灭活后制备而成的疫苗，常常存在生物安全性差、副反应大、 产品质量不稳定等问题。目前世界上很多国家已经停止使用灭活疫苗，也 禁止从使用灭活疫苗的国家进口畜产品。

随着养兔业规模化、集约化的发展，其他几大阻碍养兔业发展的传染 病仍然流行，如巴氏杆菌病、魏氏梭菌病等严重威胁养兔业的健康发展， 造成了巨大的经济损失。为了满足养兔业疾病防治的需要，需要研制出针 对巴氏杆菌病和兔病毒性出血症均为有效的疫苗。

发明内容

本发明的一目的是提供了一种制备安全性好的兔病毒性出血症、多杀 性巴氏杆菌病二联灭活疫苗的方法。

本发明提供了一种制备兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活 疫苗的方法，该方法包括以下步骤：

a.首先将兔病毒出血症毒株CD_85-2接种于家兔，采集接种后24-96 小时以内死亡家兔的心、肝、脾、肺或肾，并剔除心、肝、脾、肺或肾上 的结缔组织；

b.将剔除结缔组织的死亡家兔的心、肝、脾、肺或肾捣碎、过滤后 配成乳剂，并对该乳剂进行灭活；

c.将兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C_51-17菌株进行复活，再将复活后 的菌株进行增殖培养，将培养得到的含有兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C_51-17菌液进行灭活；

d.将步骤c得到的灭活后的菌液与佐剂进行混合，静止，得到含有 兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C_51-17的菌液；

e.将步骤b得到的灭活乳剂和步骤d得到的含有兔源荚膜A群多杀 性巴氏杆菌C_51-17的菌液混合，得到兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病 二联灭活疫苗。

优选地，在所述的步骤d和步骤e之间还包括以下步骤：将所述的含 有兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C_51-17的菌液进行浓缩，使得该菌液中兔 源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C_51-17的浓度为浓缩前的1.5倍。

灭活后的菌液进行浓缩，使得A型多杀性巴氏杆菌C_51-17的浓度为浓 缩前的1.5倍。

本发明中的兔病毒性出血症病毒CD_85-2是发明人从四川荥经、酉阳、 雅安和成都郊区四个疫区采集回数个自然感染毒，从血凝价、特异性、毒 力、免疫原性、纯净性方面进行鉴定，筛选出的毒力强、免疫原性好、血 凝价高的菌株。所述兔病毒性出血症病毒(拉丁名：Rabbit hemorrhagic disease virus)CD_85-2，其保藏编号为CGMCC No.2705，该病毒毒株已于 2008年10月14日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC，北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所，邮编100101) 进行了生物材料保藏。