[发明专利]幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测生物组织、粘液中幽门螺杆菌的试剂盒，特别是一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒

背景技术

幽门螺杆菌(HP)与慢性胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系，它的检测对胃病患者的诊断和治疗有一定的辅助作用。目前，采用最多的检测HP的银染方法是Warthin-Starry法，文献记载幽门螺旋菌组织学技术显示各种方法中，银染法比较复杂，方法稳定性较差，组织切片染色不易控制，但切片图像保存性稳定，细菌显示最清晰。即该方法不足的地方是：银染时间甚长，显影甚快，要掌握这一步骤染出HP显示较好的切片是不容易的，要选显影最好的切片应用，造成上述缺陷的原因是：对苯二酚液很容易与氧结合而被氧化为对苯二醌，而作为分散剂和稳定剂的明胶液为单独现用现配，稍有不慎将影响效果，因而该方法不能用于大批量染片，为适应目前的需要，有必要提供一种新型的幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，采用本发明，可使幽门螺杆菌的检测具有方法稳定性、可重复性和易推广性，且被检测的生物组织或粘液中幽门螺杆菌存在形态清晰，易于被检测。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

这种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，它包括：硝酸银粉末，对苯二酚明胶粉末，去离子水。

所述的硝酸银粉末与对苯二酚明胶粉末之重量比为1∶10～20；所述的对苯二酚明胶粉末中，对苯二酚粉末与明胶粉末的重量比为1∶50～200，明胶的用量太显影缓慢。

所述的对苯二酚明胶粉末为经过预处理的粉末，其处理的方法是：将对苯二酚粉末及明胶粉末分别干燥；混匀；粉碎；过筛。干燥的温度范围为40-60℃.粉末的粒度为≤50目，但粒度大于0。

生物组织准备：生物组织经石蜡包埋切片置于玻璃载物片上烤干贴附牢固备用，或刮取粘膜表面粘液和组织碎屑置于玻璃载物片上冷风干燥，95％乙醇15分钟固定备用。

本发明的原理是：利用生物组织成分对银离子的还原性质的不同，借助含银离子显影液中对苯二酚的还原显影辅助作用，使不同组织部位银离子密度不同，从而显示从浅黄色到黑色不同的色彩。也显示出不同组织部位中相同微生物的相同的形态，其中HP呈深棕色至黑色。

本试剂盒的使用方法：

加定量的试剂溶媒于分别盛有硝酸银粉末、对苯二酚明胶粉末的容器中，充分溶解备用；取部分硝酸银液加入摆放有生物组织切片、粘液涂片的清洁染色缸中，置温箱数十分钟；去离子水涮洗，备用；将剩余硝酸银液倒入对苯二酚明胶液，快速充分混合，将混合液加入摆放有生物组织切片、粘液涂片的清洁染色缸中，观察；在生物组织切片、粘液涂片呈咖啡色时，倾去显影液，自来水涮洗；脱水透明封固。

结果：组织、粘液中幽门螺杆菌呈深棕至黑色，组织图像清晰，结构分明。

本试剂保存方法：干粉状态，干燥避光处长期保存法。

由于本试剂盒的特点是采用预混合、粉末状，其优点是：

1、这种制剂方便生产及运输储存，且使用方法简便。

2、提高了溶液中银离子的有效利用率，可控制组织色彩对比度，有利于观察，其稳定性、可重复性好，还可降低试剂的用量。

附图说明

图1为人类胃组织幽门螺杆菌的银染法显示

图2为人类胃组织幽门螺杆菌的银染法显示

图3为人类牙齿刮片表面粘液内幽门螺杆菌的银染法显示

图1、2中，Hp呈大小相近的短棒状、弯曲状、螺旋状深综或黑色显像，聚居或散在出现，其中1为腺上皮，2为HP。图3为人类牙齿刮片表面粘液内幽门螺杆菌的银染法显示：Hp呈大小相近的短棒状、弯曲状深综或黑色显像，散在出现，其中，2为HP，3为脱落细胞。

具体实施方式

实施例1：人类胃粘膜表面幽门螺杆菌的显示方法

1、生物组织经石蜡包埋切片置于玻璃载物片上烤干贴附牢固备用，

2、检测的方法是：

分别取30毫升和60毫升去离子水加于分别盛有1克硝酸银粉末、2克对苯二酚明胶粉末的容器中，充分溶解备用；

取上述的一部分硝酸银液，即：20毫升硝酸银液加以一倍体积去离子水混匀，加入摆放有生物组织切片的清洁染色缸中，置60℃温箱30分钟；去离子水涮洗，备用；

将剩余硝酸银液10毫升倾入对苯二酚明胶液(对苯二酚与明胶的重量比1∶50或1∶100)快速充分混合，并将混合液加入摆放有生物组织切片的清洁染色缸中，显影2分钟；在生物组织切片呈咖啡色时，倾去显影液，自来水涮洗；脱水透明封固。