[发明专利]一株同时降解黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A的菌株的筛选、培养和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时降解AFB1和OTA的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)MZH-11，已经于2008.10.10在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC No.2775；本发明还涉及地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)CGMCC No.2775的分离、培养保存方法及应用。

背景技术

黄曲霉毒素(aflatoxin，AFT)是由Aspergillus flavus、A.nomius、A.parasiticus等多种真菌产生的次级代谢产物，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)分布范围最广且化学性质最稳定，具有很强的致癌性、致突变性和致畸性，是国际认可的A类致癌物。

赭曲霉毒素A(OTA)是赭曲霉毒素中毒性最强，分布范围最广的化合物。1993年IARC将其确定为2B类致癌物。食品法典委员会(2001)认定赭曲霉毒素对人类威胁最重要的食品类别依次为：谷类>葡萄及其制品>咖啡豆及其制品>其他。

AFB1和OTA均属于剧毒化学品(LD50≤1mg.kg^-1.bw)。而且在谷物里会同时存在，AFB1和人类的肝癌有正相关；OTA可能是地区性慢性肾病以及尿道肿瘤的原因。针对婴儿食品，国际黄曲霉毒素B1的最低限量标准为0.10μg·kg^-1，2006年欧盟最新的赭曲霉毒素A的最大限量为0.50μg·kg^-1。

地衣芽孢杆菌是普遍认可的一个功能菌株。已经在医学方面有应用，例如调整肠道菌群等。地衣芽孢杆菌可以抑制真菌，本发明中解除毒素的作用，可以应用到饲料领域；其纯化的代谢物也可以有条件的应用到食品领域。

发明内容

为了减少AFB1和OTA对人和动物的危害，减少真菌毒素在饲料和食品中的含量，最终保证食品安全，本文通过选择样本、初筛、复筛、验证效果，获得1株地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)CGMCC No.2775，该菌株可以同时降解AFB1和OTA，加标玉米中AFB1和OTA的平均降解率分别达到78％和83％。

地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)CGMCC No.2775的形态学特征为：杆状，芽孢中生，革兰氏染色阳性，菌落光滑，边缘不整齐，与营养琼脂培养与培养基结合较紧密；地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)CGMCC No.2775的形态学特征为：接触酶阴性，氧化酶阴性，发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖，不发酵半乳糖、棉籽糖、乳糖，菌株生长耐10％的盐，耐60℃温度，淀粉水解酶阳性，明胶水解阴性，pH值5-9生长；其分子生物学特征，16srDNA序列(TACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAGCCTCGCGGCTTCGCTGCCCTTTGTTCTGCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGAAGCCCTATCTCTAGGGTTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTTGCTGCAGCACTAAAGGGCGGAAACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGTTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTCGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAGCTAAAAGCCACCTTTTATGATTGAACCATGCGGTTCAATCAAGCATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTGACCTAAGGGAGCAAGCTCCCGTCGGTCCGCTCGAC)