[发明专利]一种连续、批量纯化细菌磁小体的方法有效

专利信息
申请号: 200810223498.2 申请日: 2008-09-28
公开(公告)号: CN101372364A 公开(公告)日: 2009-02-25
发明(设计)人: 姜伟;郭芳芳;李颖;关国华;田杰生;李季伦 申请(专利权)人: 中国农业大学
主分类号: C01G49/08 分类号: C01G49/08;C01G49/12
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 代理人: 王朋飞
地址: 100083*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 连续 批量 纯化 细菌 小体 方法
【权利要求书】:

1.一种连续、批量纯化细菌磁小体的方法,它包括如下步骤:

(1)破碎趋磁细菌细胞;

(2)分离并清洗磁小体,所述分离采用磁性层析系统进行,所述清洗用缓冲溶液进行;其中,所述的磁性层析系统是用规则堆放的铁珠组成,其中铁珠的直径1~6mm;

(3)用蛋白酶k消化磁小体膜上的蛋白,并进行电洗脱;

(4)去离子水置换脱盐。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在进行步骤(1)之前,在趋磁细菌中加入其体积0.1倍体积的PBS缓冲溶液,所述PBS缓冲溶液的浓度是0.1~1.0M,pH是6.5~7.5。

3.根据权利要求1所述的方法,所述破碎用高压均质机进行。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(2)所述缓冲溶液选自PBS缓冲溶液和添加尿素的PBS缓冲溶液,其中PBS缓冲溶液的浓度是1mM-100mM,pH是6.5~7.5,所述添加尿素的浓度是1~8M。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(2)之后,还包括低功率的超声分散,超声分散的参数设置为:功率20~200W,每次超声3~5秒,每两次超声之间间歇4~8秒,循环20~100次。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在进行步骤(3)之前,低功率的超声分散和步骤(2)可反复进行,重复0~6次。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于当步骤(2)所述磁性层析系统流出废液的OD280nm<0.05时,开始步骤(3)的处理。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(3)所述的蛋白酶k的浓度为0.2~5mg/L,处理温度是40~60℃,处理时间是0.5~3小时,电洗脱电流是100~400mA。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述的脱盐采用磁性搅拌系统,用去离子水进行。

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