[发明专利]一种连续、批量纯化细菌磁小体的方法有效
| 申请号: | 200810223498.2 | 申请日: | 2008-09-28 |
| 公开(公告)号: | CN101372364A | 公开(公告)日: | 2009-02-25 |
| 发明(设计)人: | 姜伟;郭芳芳;李颖;关国华;田杰生;李季伦 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
| 主分类号: | C01G49/08 | 分类号: | C01G49/08;C01G49/12 |
| 代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人: | 王朋飞 |
| 地址: | 100083*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 连续 批量 纯化 细菌 小体 方法 | ||
1.一种连续、批量纯化细菌磁小体的方法,它包括如下步骤:
(1)破碎趋磁细菌细胞;
(2)分离并清洗磁小体,所述分离采用磁性层析系统进行,所述清洗用缓冲溶液进行;其中,所述的磁性层析系统是用规则堆放的铁珠组成,其中铁珠的直径1~6mm;
(3)用蛋白酶k消化磁小体膜上的蛋白,并进行电洗脱;
(4)去离子水置换脱盐。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在进行步骤(1)之前,在趋磁细菌中加入其体积0.1倍体积的PBS缓冲溶液,所述PBS缓冲溶液的浓度是0.1~1.0M,pH是6.5~7.5。
3.根据权利要求1所述的方法,所述破碎用高压均质机进行。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(2)所述缓冲溶液选自PBS缓冲溶液和添加尿素的PBS缓冲溶液,其中PBS缓冲溶液的浓度是1mM-100mM,pH是6.5~7.5,所述添加尿素的浓度是1~8M。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(2)之后,还包括低功率的超声分散,超声分散的参数设置为:功率20~200W,每次超声3~5秒,每两次超声之间间歇4~8秒,循环20~100次。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在进行步骤(3)之前,低功率的超声分散和步骤(2)可反复进行,重复0~6次。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于当步骤(2)所述磁性层析系统流出废液的OD280nm<0.05时,开始步骤(3)的处理。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(3)所述的蛋白酶k的浓度为0.2~5mg/L,处理温度是40~60℃,处理时间是0.5~3小时,电洗脱电流是100~400mA。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述的脱盐采用磁性搅拌系统,用去离子水进行。
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