[发明专利]EGFR基因外显子20突变的检测探针、液相芯片及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的是涉及EGFR基因外显子20突变的检测探针、液相芯片及其检测方法。

背景技术

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，具有酪氨酸激酶活性，为ErbB家族的四个成员之一，因此又名HER1或ErbB1。EGFR被配体激活后启动胞内信号传导，经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应，调节转录因子激活基因的转录，指导细胞迁移、黏附、增殖、分化和凋亡。研究表明，在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达，为以EGFR为靶向的肿瘤治疗和针对EGFR信号转导通路的信号转导干预治疗提供了理论基础和实验依据。因此，以表皮生长因子受体(EGFR)为治疗靶标的分子靶向治疗成为国内外肿瘤界关注的焦点。其中，EGFR受体酪氨酸激酶抑制剂(TKI)吉非替尼(Genfitinib，Irressa)和厄洛替尼(Erlotinib，特罗凯，Tarceva)已被美国食品药品监督管理局批准用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)。我国在2005年2月也批准了吉非替尼进入临床。这些药物用于其他肿瘤(如乳腺癌、结肠癌和胃癌等)的治疗，目前也已经进入临床试验阶段。吉非替尼，厄洛替尼是一种口服的小分子EGFR拮抗剂，可与ATP竞争结合EGFR酪氨酸激酶区的ATP结合袋从而抑制EGFR的活性，已应用于晚期和不适宜传统化疗方案的非小细胞肺癌患者的临床治疗，是目前对于部分NSCLC患者治疗最有效的药物。

尽管在EGFR突变的NSCLC中，吉非替尼、厄洛替尼可以达到较好的效果，但开始治疗后6～12个月发生的耐药明显限制了患者生存时间的延长。近来研究提示，EGFR外显子20的插入性突变(D770-N771)可以使受体对EGFR-TKI的敏感性降低100倍，临床上也发现具有此突变的患者对EGFR-TKI治疗反应不明显。EGFR基因外显子20上的T790M突变大多数导致获得性耐药，也与原发耐药相关。T790M突变与其他敏感性突变如L585R同时存在时，癌症细胞对EGFR-TKI也是抵抗的。在未治疗的NSCLC患者中，T790M突变与性别、是否吸烟或组织学状态无关，但更常见于晚期患者；而且7例对TKI治疗无反应得患者中，3例与敏感性突变同时存在。在开始对吉非替尼、厄洛替尼有反应但后来复发的患者(具有EGFR突变)中，存在EGFR外显子20的继发性突变-T790M，耐药的原因是突变导致EGFR结构发生变化，使TKI与其结合出现位阻效应。一些研究这认为，药物治疗之前T190M突变细胞即在患者体内存在，当细胞暴露于TKI后，由于耐药而发挥选择作用，使T790M突变细胞数目明显增多，由此说明原发耐药和继发耐药的区别可能是T790M突变细胞的多少差异。

在TKI治疗后复发的NSCLC中有50％的患者发现有T790M突变，因此，检测EGFR外显子20基因有无突变，是临床非小细胞肺癌诊断治疗的一个重要辅助工具，可准确预测分子靶向药物治疗的有效性，便于临床准确用药，显著提高药物疗效，使病人最大限度地受益，同时可以避免不合理用药所造成的病人医疗费用增加和社会医疗资源浪费，减少不必要治疗的时效损失以及经济损失。