[发明专利]一种检测黄热病病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒及其检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，特别涉及一种检测黄热病病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒、该试剂盒的检测方法及该试剂盒在临床、口岸检验黄热病病毒的应用。 

背景技术

黄热病(yellow fever)是黄病毒科、黄病毒属的黄热病病毒(yellow fever virus，YFV)引起的急性传染病，经蚊媒传播，主要流行于非洲和中、南美洲，3-4月份的病例较多。临床特征有发热、剧烈头痛、黄疸、出血和蛋白尿等。每年全世界至少有20万黄热病病例，造成3万人死亡，其中90％病例来源于非洲。现今对于黄热病都还没有特效药物及其他治疗方法，主要仍采用对症处理及支持疗法。因此早期快速诊断是控制病情，提高治愈率，避免临床误诊贻误治疗时机的关键。 

黄热病预防接种证书是世界卫生组织唯一要求的国际旅行预防接种证书，可见世界卫生组织对黄热病这种烈性传染病的重视程度。我国部分地区的地理、气候、传播媒介-蚊、传染源-猴等条件与非洲、中、南美洲相似，但至今尚无本病流行或确诊病例的报道。虽然我国至今尚无黄热病流行或确诊病例的报告，但随着全球经济的发展，国际间的人群交往更为便利，全球贸易一体化和都市化生活等趋势使得病毒和传播媒介更易在各个国家之间传播。所以有必要建立黄热病病毒的快速分子生物学检测方法，在国境口岸对出入境人群和媒介生物进行早期快速的检测和监控，防止该传染病在口岸的传入，做到及时预防、控制疾病的传播，对保障我国的经济发展和人民身体健康有着重要的意义。 

目前国内对黄热病病毒的研究较少，仅建立了该病毒的组织培养和RT-PCR 检测方法。国外对黄热病病毒的诊断方法主要包括组织培养、血清学诊断和新发展的分子生物学方法。黄热病病毒的组织培养要求实验室的生物安全等级高，需在BSL-3实验室进行，病毒分离、鉴定的时间较长，且检测灵敏度不高；血清学方法主要包括(1)补体结合试验：主要检测补体结合抗体，阳性反应出现较迟，临床实验室较少采用；(2)中和试验：方法很复杂，一般不应用于临床；(3)血凝抑制试验，需采集双份血清标本，以第二份血清的抗体效价呈4倍以上升高为近期感染指标。此外，尚有报道采用捕获ELISA、间接免疫荧光等方法检测特异性抗体。但由于黄病毒不同毒株间存在广泛血清学交叉反应，会影响血清学诊断结果的特异性。