[发明专利]血液分析试剂及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及血液分析试剂及其使用方法，更具体地讲，本发明涉及用于对血液中细胞进行分类计数的血液分析试剂及采用所述试剂进行血液分析的方法。

背景技术

在正常人体内，嗜碱性粒细胞数量较少，仅占白细胞总数的0-1％。但在重金属中毒、何杰金病、慢性粒细胞白血病等疾病中，嗜碱性粒细胞的数量会明显升高，因此嗜碱性粒细胞计数对于这些疾病的诊断具有重要意义。

过去，临床上经常使用一些化学染料来对嗜碱性粒细胞进行染色计数，包括瑞氏-吉姆萨复合染色法、甲苯胺蓝染色法和中性红染色法等。这些方法仅能提供嗜碱性粒细胞的百分比计数，同时操作时间长、易受操作者主观影响，并不适合临床大规模标本的检测。

US4,882,284公开了一种对白细胞进行分类计数的方法。方法中使用了荧光染料对白细胞进行染色，然后通过测定荧光、侧向散射光和前向角散射光信号可将白细胞分成淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞五个亚群。但由于嗜碱性粒细胞的荧光和前向角散射光信号与中性粒细胞、单核细胞的荧光和前向散射光信号有部分重叠，因此使用这个方法对嗜碱性粒细胞数量正常或偏低的标本进行测定时，计数和分类结果并不准确。

US5196346公开了一种用于嗜碱性粒细胞计数的试剂和方法。试剂中含有聚氧乙烯醚类(polyoxyethylene ether)表面活性剂等组分。该 方法仅使用单一参数(阻抗信号)对嗜碱性粒细胞进行分类计数，与多参数的分类方法相比，其准确性较低。

US5538893、US5677183、US5518928分别公开了一种用于嗜碱性粒细胞分析用试剂和方法。试剂中的主要成分包括非离子表面活性剂类的聚氧乙烯醇醚(polyoxyethylene glycol ether)等组分。此试剂可将除嗜碱性粒细胞以外的白细胞裸核化，唯独保持嗜碱性粒细胞的结构完整。然后通过测定细胞的阻抗或低角散射光获得细胞大小方面的信号，再通过测定细胞的侧向或高角散射光获得细胞内部结构方面的信号，最后将两种信号进行组合即可对嗜碱性粒细胞进行分类计数。

US6214625B1公开了一种对嗜碱性粒细胞和嗜酸粒细胞进行分类计数的试剂和方法。试剂由一种溶血剂和一种稳定剂组成。使溶血剂与血液细胞混合一定时间，以仅保持嗜碱性粒细胞的结构完整，随后添加稳定剂。最终，通过测定细胞的阻抗、旋转散射光(rotatedlight scatter)信号，或者射频(radio frequency)、log光散射(log lightscatter)即可对嗜碱性粒细胞进行分类计数。这一方法测定的参数较多，需要多个特殊的测定装置，仪器结构复杂、价格昂贵。

应用流式技术或阻抗方法对嗜碱细胞进行分析的基本原理是根据大小进行区分。一般采用在酸性条件下处理血液样本，由于嗜碱细胞的特性，在此处理条件下，嗜碱细胞仍然保持完整细胞形态，而嗜碱细胞以外的白细胞基本都被裸核化，这样从大小信息就可以识别嗜碱细胞。但是一些异常血液样本，如含有未成熟细胞、异常细胞等，在此处理条件下不形成裸核，仍保持完整细胞结构，这样根据大小信息进行识别嗜碱细胞时，形成嗜碱细胞数目假性增高。

一般在嗜碱细胞识别的通道中进行白细胞总数计数，但是由于有核红细胞(NRBC)的干扰，使得含有有核红的样本的白细胞总数计数出现偏差，需要扣除单独有核红的计数部分，才能获得准确的白细胞总数计数。

有核红细胞作为未成熟红细胞，可分为早、中、晚幼红细胞，通常存在骨髓等造血组织器官，在正常成人外周血中极少出现。外周血中有核红细胞的出现和许多疾病状态以及不良的预后有关，如溶血性贫血、急慢性白血病、红白血病、髓外造血及严重缺氧等，对一些胎儿疾病的诊断及预后也具有重要的临床价值。

传统方法使用手工镜检方式检测外周血中的有核红细胞，这种方法容易受到检测者的主观因素影响，并且计数细胞数目太少，造成误差大，并且耗时费力。

在美国专利号5648225、5559037、5874310、6472215、5298426、6911313中分别公开了有核红细胞的检测方法。

上述公开的试剂和方法中，都需要采用分别采用单独的试剂和通道进行嗜碱细胞和有核红细胞的识别，不能同时进行有核红细胞和嗜碱细胞的识别，而且技术操作比较复杂，不仅试剂和仪器成本较高，而且影响血液分析整体测试速度。

发明内容

本发明一方面提供了一种血液分析试剂，所述试剂包括：

(1).具有通式I结构的化合物：

其中