[发明专利]花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及荧光染料。具体地讲，本发明涉及适合用于生物样品 染色的花菁类化合物，包含所述花菁类化合物的组合物及其在生物样 品染色中的用途。

背景技术

有核红细胞(Nucleated red blood cells，NRBC)是未完全成熟的红 细胞，可以分为早、中、晚有核红细胞，通常存在于骨髓等造血组织 或器官中。当外周血中有核红细胞数量增加时，可能是机体贫血、缺 氧等生理和病理代偿反应。最近的研究证实，母体外周血中存在少量 胎儿的有核红细胞。同时发现，在某些妊娠病理状态下，如发热、妊 娠高血压征、胎儿宫内缺氧等，母体外周血中的胎儿有核红细胞有增 多的情况。因此，测量NRBC具有重要的临床意义。

以往，临床中采用手工镜检法分析和鉴定有核红细胞。该方法费 时且在较大程度上依赖检验员的经验和主观判断。

70年代发展了流式细胞术(Flow Cytometry，简称为FCM)，该技术 利用流式细胞仪可对细胞等生物粒子进行定量、快速、客观多参数相 关检测分析。血液自动分析装置应用了流式细胞术，利用核染色技术 可以将NRBC与其他细胞类型区分开。这样，可以在一般检查室进行 血液细胞的分类和计数，大大提高了检测的效率。

美国专利US5298426公开了一种两步法分析NRBC的荧光法。 采用两步法降低了测试了效率。

美国专利US5559037提出了基于流式细胞技术的NRBC和白细 胞分析方法。在该方法中利用的核酸染料为溴化乙锭，它和核酸形成 的复合物在光照过程中容易产生光漂白，同时该物质能诱发癌变，灵 敏度较低，对仪器的操作者和环境构成了一定的威胁。

美国专利US5879900公开了基于流式细胞技术对血液中NRBC、 破坏的白细胞及白细胞分类的方法。该方法包括先向待测血液样本中 加入荧光标记的抗体，不仅增加了检测的成本，也使检测步骤复杂。

美国专利US6197593提出了一种采用SYTO系列作为核酸染料， 对血液样品中的网织红细胞、有核红细胞和红细胞进行分类的方法。 这类染料的合成工艺路线长。

因此，需要继续开发出新的荧光染料，以满足对生物样品进行准 确、快速检测的需要。

发明内容

本发明一方面提供了一种具有通式I结构的化合物：

其中

R₁、R₂各自独立选自C_1-18烷基COOR₆、C_1-18烷基OR₆和苄基， 其中苄基由选自以下的取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、 硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、 酰氨基和羧基，并且R₁和R₂不同时为苄基；

R₆每次出现时独立为H、C_1-18烷基或者苯基，其中苯基由选自以 下的取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、 烷氧基、杂环基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰氨基和羧基；

X为CH₂、C(CH₃)₂、O、S或Se；

Y为-CH₂-CH＝CH-、或

和各自独立为或

R₃、R₄和R₅各自独立选自H、卤素、氰基、羟基、C_1-18烷基、 C_1-18烷基磺酸基、磺酸基和C_1-5烷基COOR₇；

R₇为H或C_1-6的烷基；

Z^-为阴离子。

本发明还一方面提供一种缀合物，所述缀合物包含上述式I化合 物。

本发明另一个方面还提供用于生物样品染色的组合物，所述组合 物包含上述式I化合物或其缀合物。

本发明再一方面还提供了本发明式I化合物或其缀合物在对生物 样品进行染色中的用途。