[发明专利]一种花生水通道蛋白基因AhAQ1及其编码蛋白质及其基因克隆方法无效
| 申请号： | 200810215554.8 | 申请日： | 2008-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN101671677A | 公开（公告）日： | 2010-03-17 |
| 发明（设计）人： | 禹山林;江燕;杨庆利;陈明娜;潘丽娟;朱凤;任增凯 | 申请（专利权）人： | 山东省花生研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/10;C07K14/415 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 | 代理人： | 赵 军;张 瑾 |
| 地址： | 266100山东省青岛市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种花 生水 通道 蛋白 基因 ahaq1 及其 编码 蛋白质 克隆 方法 | ||
1.一种花生水通道蛋白基因AhAQ1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种如权利要求1所述花生水通道蛋白基因AhAQ1编码的蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.一种如权利要求1所述花生水通道蛋白基因AhAQ1的克隆方法，包括如下步骤：
(1)选用花生种子作为实验材料，经盐诱导后取植物组织置于研钵中，室温下采用Trizol reagent抽提总RNA，并且采用DNase I处理，以去除样品中的基因组DNA污染，RNA含量及质量采用琼脂糖凝胶电泳检测；
(2)利用Promega的RT-PCR体系反转录获得cDNA；
(3)根据EST信息设计花生AhAQ1基因编码区引物；
正向引物：5’-CACACTTACCCATCTCATCAC-3’
反向引物：5’-CAATAATCAAGCACTTGCATT-3’
反应体系：2.5μl含MgCl2的10×PCR缓冲液，0.5μl 10μM的引物，1.0μl 20mM的dNTPs，1μl cDNA样品，0.5μl Ex-Taq酶，19μl双蒸水，PCR反应程序为95℃预变性5min，95℃变性30s，51℃复性30s，72℃延伸1min，28个循环后，72℃延伸10min；
(4)PCR产物回收后与pMD18-T simple vector连接，连接产物转化E.coli Top 10感受态细胞，采用蓝白斑法筛选阳性克隆，筛选的阳性克隆经PCR进一步验证后测序，获得AhAQ1基因。
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