[发明专利]聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法

权利要求书

1、聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，其特征在于聚羟基乙酸-猪胰岛复合物按以下步骤制备：一、处理聚羟基乙酸支架，将聚羟基乙酸支架用浓度为10mg/mL的多聚赖氨酸溶液包埋30min，然后放入超净台内吹干，再浸泡入体积浓度为75％的乙醇溶液中30min，之后用PBS缓冲液冲洗3～4次，再放入超净台内吹干，并用紫外灯照射1h；二、三维微重力细胞培养，将聚羟基乙酸支架放入三维微重力组织细胞培养系统的组织培养容器中，加入1mL培养基，然后将猪胰岛细胞均匀地放在聚羟基乙酸支架上，再加入RPMI-1640培养液，之后将组织培养容器中的气泡排空、盖紧组织培养容器盖，放入体积分数为95％空气、5％ CO₂、37℃的恒温培养箱中进行微重力培养，即得到聚羟基乙酸-猪胰岛复合物；其中步骤二中三维微重力组织细胞培养系统的旋转速度在匀加速的情况下，在24小时中由15r/min增至45r/min，并保持45r/min的转速继续培养3～5天；步骤二中加入的培养基按以下步骤制备：先将10.4g的RPMI-1640培养基干粉溶于1L超纯水中，再加入浓度为10mmol/L的Hepes2～3g，并用NaHCO₃溶液调pH值到7.4，滤过除菌后加入超纯水体积10％～20％胎牛血清，再加入青霉素和链霉素使培养基中青霉素终浓度为100U/mL、链霉素终浓度为100μg/mL。

2、根据权利要求1所述的聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，其特征在于步骤一多聚赖氨酸溶液中多聚赖氨酸的相对分子质量为1.5×10⁴～3×10⁴。

3、根据权利要求1或2所述的聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，其特征在于步骤一中聚羟基乙酸支架的纤维直径为13～17μm，网孔直径为100～150μm，孔隙率为96％～98％，厚度为1～2mm，长度为4～6mm，宽度为4～6mm。

4、根据权利要求3所述的聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，其特征在于步骤二中用质量浓度8.4％的NaHCO₃溶液调pH。

5、根据权利要求1、2或4所述的聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，其特征在于步骤二中所加入的培养基制备后放于4℃环境中储存。