[发明专利]一种免PCR扩增无需检测仪器的核酸分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，具体地涉及一种免PCR扩增无需特殊检测 仪器的核酸分析方法。

背景技术

目前常规分析方法的灵敏度还不足以直接分析检测生物的目标核酸(DNA或 RNA)，一般均需对目标片断进行PCR扩增，使其富集到一定浓度后才可用于检 测。由于PCR反应具有强大的扩增效率，易造成交叉污染，极微量的污染便可 导致假阳性结果。

一直以来，科研工作者开发了一些免PCR扩增的方法用于核酸分析，这些 方法大多是放大信号而非富集目标物。如：杂交捕获法(WO 03/078966，美国 Digene公司)，bDNA法，Monica K等人综合运用Luminex流式荧光技术和 Dendrimer技术直接检测目标核酸(JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY，July 2005，p.3255-3259，Vol.43，No.7)。

此外，美国Nanosphere公司还开发了商业化的仪器和试剂，不扩增目标DNA 片断而是扩增信号，做到了直接检测目标核酸(www.nanosphere.us)。这些方法 均需特殊的配套仪器对产生的信号进行检测，成本较高。

然而，在我国购置价格昂贵的仪器对于许多用户或许多场合而言是不现实 的。另外，购置仪器后维护成本高和使用率低也成为一大问题。

因此本领域需要一种成本低廉又无需PCR扩增的核酸分析方法，便于核酸 分析技术的普及推广。

发明内容

本发明的目的就是提供一种成本低廉又无需PCR扩增的核酸分析方法。

本发明的另一目的是提供一种可以在不使用昂贵检测仪器或基本上无需检 测仪器的情况下进行核酸分析的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种携带检测探针的生物素-亲和素的复合 物，所述复合物包括：

(a)固相载体；

(b)根序列，所述的根序列是固定于所述固相载体表面上的寡核苷酸单链；

(c)引发序列，所述的引发序列是互补结合于所述根序列的、并且在一端 标记有生物素的寡核苷酸单链；

(d)第n级亲和素，其中n为1-20的正整数；并且当n为1时，则第1级 亲和素结合于所述引发序列上的生物素；

(e)生长序列，所述的生长序列是两端标记有生物素的寡核苷酸单链，所 述生长序列中位于一端的生物素与第n级亲和素结合，而位于另一端的生物素 与第n+1级亲和素结合，其中n为1-20的正整数；和

(f)检测探针，所述的检测探针是一端标记有生物素的寡核苷酸单链，而 且所述检测探针中的生物素与第n级亲和素结合，并且所述的检测探针包括与 目标核酸检测区互补的检测互补结合区以及与信号探针互补的信号互补结合 区。

在另一优选例中，所述的固相载体是微球，更佳地为磁性微球。

在另一优选例中，n为6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19或20。

在另一优选例中，所述的根序列的长度为20-60个碱基，更佳地为25-50 个碱基；

在另一优选例中，所述的引发序列的长度为10-50个碱基，更佳地为15-40 个碱基。

在另一优选例中，所述引发序列与根序列的互补结合区的长度为20-40bp， 更佳地为20-30bp。

在另一优选例中，所述的生长序列的长度为8-30个碱基，更佳地为10-20 个碱基。

在另一优选例中，所述的生长序列是长度为8-20个碱基的polyT。

在另一优选例中，所述的检测探针的长度为40-80个碱基，更佳地50-70 个碱基。

在另一优选例中，所述的检测探针中与目标核酸检测区互补的检测互补结 合区长度为20-30个碱基。

在另一优选例中，所述的检测探针中与信号探针互补的信号互补结合区长 度为15-20个碱基。

在另一优选例中，所述的检测探针中的检测互补结合区和信号互补结合区 之间是长度为0-50个碱基(较佳地4-30个碱基，更佳地8-15个碱基)的间隔区。

在本发明的第二方面，提供了一种携带检测探针的生物素-亲和素的复合 物，所述复合物包括：