[发明专利]用于诊断非小细胞肺癌的血清标志物

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学特别是基因诊断领域，尤其是DKK-1蛋白在诊断癌症 中的应用。

背景技术

肺癌是国际上癌症死亡的主要原因[1]。目前我们主要是根据临床病理特征对 肺癌进行分期[2]，但有时候这些临床信息对预测病人的预后是不完全正确的或误 导的[3，4]。利用分子诊断方法可能提供更为准确、客观和系统的癌症分期，然而， 对于能够预测大部分实体瘤的标准分子标志物还未发现。据报道，在非小细胞肺癌 (NSCLC)患者中已经发现了几种潜在的具有预后意义的生物的和分子的参数，包括： K-ras突变体、c-erbB过表达和p53突变体。

1998年，Glinka A等在《Nature》杂志上发表研究文章(Nature，1998； 391(6665)：357-362)宣布：他们在非洲爪蟾(Xenopus laevis)胚胎发育研究中发现 了一种新的分泌性蛋白，命名为dickkopf-1(dkk-1)。他们的研究工作证实：dkk-1 是Wnt信号通路的抑制因子，是非洲爪蟾胚胎发育过程“头部(head induction)” 形成的“引发者(inducer)”。稍后，1999年Fedi P等(J Biol Chem，1999； 274(27)：19465-72)采用条件色谱分离方法和PCR方法，从人平滑肌肉瘤细胞 SK-LMS-1及相应cDNA文库中，分离获得了dkk-1的人的同源基因，其mRNA转录 本约为2kb，编码266个氨基酸。从此，科学家通过近5年的研究，初步揭示了DKK-1 作为Wnt信号通路抑制因子的分子机制。

在研究DKK-1的功能和作用机制的过程中，科学家亦注意到DKK-1与某些人 类疾病有关。如骨质疏松症(Biochem Biophys Res Commun，2004；318(1)：259-264. N Engl J Med，2002；346(20)：1513-1521)、多发性骨髓瘤引发的骨损害(N Engl J Med，2003；349(26)：2483-2494)以及某些人类恶性肿瘤，如Mikheev AM等 (Carcinogenesis，2004；25(1)：47-59)利用人子宫颈癌Hela细胞系建立了两株非 致瘤性的回复突变型(non-tumorigenic revertant)细胞系，并利用cDNA芯片技术 发现DKK-1在上述两株非致瘤性的回复突变型Hela细胞系中高表达，其研究发现 DKK-1表达的缺失是Hela致瘤性所必需的，因此认为DKK-1是一个候选肿瘤抑制 基因；另外，Wirths O等(Lab Invest，2003；83(3)：429-434)利用“抑制差减杂 交技术(suppression subtractive hybridization approach)”发现DKK-1在儿童 肝母细胞瘤(hepatoblastoma)和Wilms’肿瘤中高表达，其结果表明：32例儿童肝 母细胞瘤中26例DKK-1高表达(26/32，81％)、6例Wilms’肿瘤中5例DKK-1高表 达(5/6，83％)，而在20例肝癌病人中仅2例DKK-1高表达(2/20，10％)、5株成神 经管细胞瘤(medulloblastoma)细胞系中仅1例DKK-1高表达(1/5，20％)，在恶性 胶质瘤和乳腺癌中未检测到DKK-1表达。

然而，现今对于DKK-1在各肿瘤中的表达机制并不完全清楚，需要更灵敏和 更可靠的手段来对癌症进行检测。尽管现代外科技术和辅助化放疗水平已有很大提 高，但肺癌仍然是所有恶性肿瘤中预后最差的一种癌症。因此，现在急需发现一种 新的、具有诊断意义的生物标志物来对癌症进行早期诊断及为个体患者提供更好的 辅助治疗方法。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种诊断肺癌的有效方法。

在本发明的第一个方面，提供了DKK-1蛋白在制备肺癌，特别是非小细胞肺 癌的诊断试剂或试剂盒中的用途。在一个优选实施方式中，DKK-1蛋白与标记融 合。优选标记选自生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。优选标记还选自 可用于分离纯化蛋白质的标记，例如各种能够与层析柱结合的配体，从而能够使得 分离纯化DKK-1的过程更加方便。优选试剂或试剂盒还含有抗-DKK-1特异性抗体。